[发明专利]一种PRRSV-1病毒样颗粒及其制备方法在审
| 申请号： | 201910114837.1 | 申请日： | 2019-02-14 |
| 公开（公告）号： | CN109721643A | 公开（公告）日： | 2019-05-07 |
| 发明（设计）人： | 金宁一;李昌;许汪;杜寿文;田明尧;鲁会军;李霄;姜宇航;宋利娜;陈竞;付婷婷;郝鹏飞 | 申请（专利权）人： | 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所 |
| 主分类号： | C07K14/08 | 分类号： | C07K14/08;C12N15/866;A61K39/12;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京知呱呱知识产权代理有限公司 11577 | 代理人： | 杜立军;孙进华 |
| 地址： | 130122 吉林省长*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 病毒样颗粒 基质蛋白 穿梭载体 制备 重组杆状病毒 结构蛋白 重组杆状病毒基因组 感受态细胞 方法适合 杆状病毒 呼吸障碍 基因克隆 共表达 猪繁殖 综合征 放大 克隆 疫苗 基因 转化 应用 开发 | ||
1.一种PRRSV-1病毒样颗粒，其特征在于包括：
PRRSV LV结构蛋白GP5，其氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示；
PRRSV LV基质蛋白M，其氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；
所述病毒样颗粒表面同时包含PRRSV LV基质蛋白M以及PRRSV LV结构蛋白GP5。
2.如权利要求1所述的PRRSV-1病毒样颗粒，其特征在于，
所述PRRSV LV结构蛋白GP5的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
3.如权利要求1所述的PRRSV-1病毒样颗粒，其特征在于，
所述PRRSV LV基质蛋白M的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。
4.猪繁殖和呼吸障碍综合症疫苗，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的PRRSV-1病毒样颗粒和佐剂。
5.制备权利要求1所述的PRRSV-1病毒样颗粒的方法，其特征在于包括以下步骤：
分别克隆PRRSV LV株中表达GP5蛋白和基质蛋白M的基因；
将表达GP5蛋白和基质蛋白M的基因克隆至杆状病毒穿梭载体上，获得重组杆状病毒穿梭载体；
将所述重组杆状毒穿梭病载体转化至DH10Bac感受态细胞，获得重组杆状病毒基因组；
将所述重组杆状病毒基因组转染SF9细胞，获得重组杆状病毒；
将所述重组杆状病毒感染High Five细胞，获得所述PRRSV-1病毒样颗粒。
6.如权利要求5所述的PRRSV-1病毒样颗粒的方法，其特征在于，
所述克隆PRRSV LV株中表达GP5蛋白基因的引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
7.如权利要求5所述的PRRSV-1病毒样颗粒的方法，其特征在于，
所述表达基质蛋白M的基因的引物序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
8.如权利要求7所述的PRRSV-1病毒样颗粒的方法，其特征在于，
所述M的基因的引物上游扩增引物中添加如SEQ ID NO.5所示的syn21序列；
所述M的基因的引物下游扩增引物中添加如SEQ ID NO.6所示的Flag序列。
9.如权利要求5所述的PRRSV-1病毒样颗粒的方法，其特征在于还包括对所述PRRSV-1病毒样颗粒采用蔗糖垫超速离心法和蔗糖密度梯度离心法纯化步骤。
10.如权利要求5所述的PRRSV-1病毒样颗粒的方法，其特征在于，
所述重组杆状病毒培养，获得第三代重组杆状病毒，并感染High Five细胞。
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