[发明专利]一种PRRSV-1病毒样颗粒及其制备方法

说明书

本发明实施例公开了一种PRRSV‑1病毒样颗粒，其包括：PRRSV LV株结构蛋白GP5；PRRSV LV株基质蛋白M；所述病毒样颗粒的表达PRRSV LV基质蛋白M以及共表达PRRSV LV结构蛋白GP5。本发明实施例还提供制备所述PRRSV‑1病毒样颗粒的方法，其包括以下步骤：分别克隆PRRSV LV株中表达GP5蛋白和基质蛋白M的基因；将表达GP5蛋白和基质蛋白M的基因克隆至杆状病毒穿梭载体上，获得重组杆状病毒穿梭载体；将所述重组杆状病毒穿梭载体转化至DH10Bac感受态细胞，获得重组杆状病毒基因组。该方法适合于进行大规模的放大制备抗欧洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征疫苗，安全性高，具有良好的开发与应用前景。

技术领域

本发明实施例涉及生物制药技术领域，具体涉及一种PRRSV-1病毒样颗、制备方法及其应用。

背景技术

目前，猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratorysyndrome virus，PRRSV)引起的猪繁殖与呼吸障碍综合征(Porcine reproductive andrespiratory syndrome，PRRS)是养猪行业重要的病毒性传染病之一。被感染的猪群主要表现为母猪的繁殖障碍、仔猪的呼吸障碍及断奶仔猪高死亡率等，感染后康复猪群往往处于隐性感染状态，并可长期排毒。PRRSV在全球养猪行业中普遍存在，给全球养猪行业带来巨大的经济损失，同时也给食品安全增加了一定的风险。

PRRSV为单股正链RNA病毒，基因组全长约15kb，与核衣壳缠绕在一起。11个开放阅读框(ORFs)共编码24种不同的蛋白质，其中ORF1a和ORF1b共编码16种非结构蛋白，主要在病毒基因组的转录和翻译过程中发挥调节作用；剩余的基因编码8种结构蛋白作用于病毒的进入、组装、出芽等过程。ORF2-4共编码4个糖基化次要结构蛋白GP2a、E、GP3、GP4，是病毒感染与组装过程中必不可少的成分；ORF5a编码的非糖基化次要结构蛋白GP5a，在病毒的感染与组装过程中并非必须，但会影响病毒的复制水平；ORF5编码糖基化蛋白GP5是PRRSV的主要囊膜结构蛋白之一，也是病毒的主要中和抗原表位的聚集区；ORF6编码的非糖基化蛋白M，与GP5蛋白通过二硫键形成异源二聚体，是形成病毒粒子最基本的结构；ORF7编码的非糖基化核衣壳蛋白N蛋白可形成同源二聚体，携带病毒基因组入核，与细胞的转录因子互作。

PRRSV分为以LV株为代表的欧洲型(PRRSV-1)和以VR-2332株为代表的美洲型(PRRSV-2)两种基因型，其相似度仅为54％-67％。由于PRRSV的突变与重组速度非常快，根据ORF5的系统发育进化分析我们可知，平均变异速度为10^-2/site/year，不断出现的重组新毒株对我国境内主要流行的高致病性PRRSV感染机制的研究也带来了更大的挑战。

病毒样颗粒(Virus-like particles，VLPs)由病毒的单分子结构蛋白高度有序的组装在一起形成，能够有效激活B细胞免疫应答。VLPs具有特殊的微粒结构非常容易被抗原递呈细胞所摄取，且自身具有良好的佐剂功能，从而能更加有效的激活固有免疫和适应性免疫应答，具有良好的应用前景。

综上所述，由于PRRSV病毒突变速度较快，现有的VLPs疫苗不能满足实际的需要，制备过程复杂，无法大规模生产，并且无法应对病毒的突变速度，亟待研发对于PRRSV-1病毒样颗粒制备方法及该病毒样颗粒的应用。

发明内容

为此，本发明实施例提供一种PRRSV-1病毒样颗粒，以解决现有技术中制备病毒样颗粒过程复杂，无法大规模生产以及无法满足现有疫苗对病毒样颗需求问题。

本发明实施例另一方面提供PRRSV-1病毒样颗粒制备方法及应用。

为了实现上述目的，本发明的实施方式提供如下技术方案：

一种PRRSV-1病毒样颗粒，其特征在于包括：