[发明专利]基于MultiBac杆状病毒表达系统的禽流感疫苗及制备与应用

说明书

本发明涉及生物工程及病毒疫苗技术领域，具体涉及一种基于MultiBac杆状病毒表达系统的禽流感疫苗及制备与应用。本发明选择H7N9和/或H5N1亚型禽流感病毒流行毒株的HA基因作为靶抗原，使用MultiBac杆状病毒表达系统快速高效表达H7N9和H5N1亚型禽流感病毒的HA蛋白，进一步制备得到禽流感疫苗，该疫苗克服了现有流感灭活疫苗在生产及灭活过程中存在散毒风险的问题，提供了一种防控H7N9和H5N1禽流感病毒流行传播的候选疫苗。

技术领域

本发明涉及生物工程及病毒疫苗技术领域，具体涉及一种基于MultiBac杆状病毒表达系统的禽流感疫苗及制备与应用。

背景技术

目前禽流感病毒防控主要以预防为主，当前使用最广泛的是多价灭活禽流感疫苗。当前禽流感灭活疫苗主要以鸡胚生产为主，在生产和灭活病毒过程中容易造成病毒扩散，引起生物安全问题，因此开发一种更加安全、快速、有效的候选疫苗迫在眉睫。基因工程疫苗因其安全、快速、有效的特性引起人们的重视，成为开发禽流感候选疫苗的热点。禽流感病毒的血凝素(hemagglutinin，HA)基因表达的HA蛋白是其最重要的靶抗原，并且HA基因在同一亚型的禽流感病毒中核苷酸同源性较高，所以大多数基因工程疫苗开发主要以HA基因为主，生产特异性禽流感疫苗。

杆状病毒表达载体系统是基因工程疫苗开发的热门，作为一种真核表达系统，其表达的外源基因产物和天然产物具有相似的生物学活性，具有极高的应用价值。MultiBac杆状病毒表达系统因其能将多种外源基因同时插入到杆状病毒基因组中的特性引起人们的重视，通过该系统同时表达多种外源基因，对于开发多价禽流感疫苗具有重要应用价值。并且通过该系统表达的外源蛋白生物活性好，具有多种应用价值。

因此本发明基于现有流感疫苗存在的弊端，旨在开发一种基于杆状病毒表达载体系统的禽流感基因工程疫苗，以其安全、快速、有效的特性防控H7N9和H5N1亚型禽流感病毒的流行。

发明内容

为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种基于MultiBac杆状病毒表达系统的禽流感疫苗。

本发明的另一目的在于提供上述基于MultiBac杆状病毒表达系统的禽流感疫苗的制备方法，该方法选择H7N9和/或H5N1亚型禽流感病毒流行毒株的HA基因作为靶抗原，使用MultiBac杆状病毒表达系统分别表达H7N9和H5N1亚型禽流感病毒的HA蛋白，进一步制备得到禽流感疫苗。

本发明的再一目的在于提供上述基于MultiBac杆状病毒表达系统的禽流感疫苗的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种基于MultiBac杆状病毒表达系统的禽流感疫苗，包含可溶性HA蛋白(hemagglutinin，HA)，该可溶性HA蛋白由能够表达禽流感病毒HA蛋白的重组修饰的杆状病毒表达；

所述的禽流感病毒为H7N9亚型禽流感病毒和H5N1亚型禽流感病毒中的至少一种；

所述的H7N9亚型禽流感病毒的HA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述的H5N1亚型禽流感病毒的HA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

编码上述H7N9亚型禽流感病毒的HA蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

编码上述H5N1亚型禽流感病毒的HA蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述的重组修饰的杆状病毒的基因组中v-cath基因和chiA基因被破坏失去功能作用并且在基因组中插入了单启动子基因盒；

所述的单启动子基因盒自上游至下游包括如下组件：多角体蛋白(Polyhedron，PH)启动子和编码禽流感病毒的HA蛋白的基因；