[发明专利]一种测定豆芽中6-苄基腺嘌呤的方法

权利要求书

1.一种测定豆芽中6-苄基腺嘌呤的方法，其特征在于：它是采用超声辅助-分散液液微萃取-超高效液相色谱-串联质谱的测定方法，包括如下步骤：

(1)制备基质提取液：取待测豆芽样品粉碎，加甲醇提取，再加无水硫酸钠和氯化钠提取，离心，取上清液过滤，得基质提取液；

(2)制备供试品溶液：取步骤(1)基质提取液，依次加入水和氯化钠溶解，再注入萃取剂混匀，萃取，离心，取底层沉积相作为供试品溶液；

(3)制备标准工作溶液：称取6-苄基腺嘌呤标准品，加甲醇溶解，稀释，用步骤(1)基质提取液定容，作为标准工作溶液；

(4)分别将标准工作溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱-质谱联用仪进行分析：

色谱条件如下：

色谱柱：C18色谱柱；

流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％甲酸水溶液；

梯度洗脱条件：

0～1min：10％甲醇，1～10min：90％甲醇，0～11min：10％甲醇，11～13min：10％甲醇；

质谱条件：

离子化模式，电喷雾离子源；

检测方式：正离子扫描；

扫描模式：选择反应监控；

(5)定性定量分析。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(1)所述样品、甲醇、无水硫酸钠和氯化钠的质量体积比为2g：10ml：5g：3g。

3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(1)所述提取为涡旋提取，涡旋提取速度为11000rpm，加甲醇涡旋提取的时间为3min，加无水硫酸钠和氯化钠涡旋提取的时间是1min。

4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(1)所述离心的转速为4500r/min，时间5min；和/或，所述过滤为过0.45μm滤膜。

5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(2)所述基质提取液、水、氯化钠和萃取剂的质量体积比为：1ml：5ml：1.5g：100μl；和/或，所述萃取剂为四氯乙烷；和/或，所述萃取为超声萃取，时间为10min；和/或，所述离心的转速为12000r/min，时间5min。

6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(3)所述标准工作液的浓度为0.2ng/ml，0.5ng/ml，1ng/ml，5ng/ml，10ng/ml，50ng/ml和/或100ng/ml；所述定容时基质提取液的加入量为定容体积的1/2。

7.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(4)所述C18色谱柱为WatersAtlantis T3色谱柱，规格为150mm×2.1mm×3μm；和/或，所述色谱条件中，进样量：10μL，柱温为40℃，流速为0.5mL/min。

8.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(4)所述质谱条件中，喷雾电压:4500V，金属毛细管温度：350℃，鞘气压力：30psi，辅助气压力：5psi，Q1半峰宽:0.7Da，Q3半峰宽：0.7Da，特征定量碎片离子N1碰撞能量：21eV，特征定性碎片离子N2碰撞能量：16eV。

9.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(5)所述定性定量分析的方法为：通过特征定量母离子M和特征定性碎片离子N2进行定性；通过特征定量碎片离子N1峰面积外标法进行定量。

10.根据权利要求8或9所述的测定方法，其特征在于：所述特征定量母离子M荷质比为225.3，特征定量碎片离子N1和特征定性碎片离子N2荷质比分别为91.0和148.0。