[发明专利]经修饰的T细胞、其制备方法及用途

权利要求书

1.一种制备经修饰的T细胞的方法，包括减少或消除T细胞中抑制性蛋白表达的步骤，其中所述抑制性蛋白选自Tim3、PD1或其组合。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述T细胞是包含外源T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)的T细胞。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中通过反义RNA、antagomir、siRNA、shRNA、大范围核酸酶、锌指核酸酶、转录激活因子样效应物核酸酶或CRISPR系统实施所述减少或消除。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述CRISPR系统是CRISPR/Cas9系统。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述CRISPR/Cas9系统靶向所述细胞内选自SEQ IDNO:17-23、SEQ ID NO:26中一或多种的核苷酸序列。

6.根据权利要求2-5任一项所述的方法，其中所述TCR或CAR包含针对肿瘤相关抗原的抗原结合结构域，其中所述肿瘤相关抗原选自表皮生长因子受体(EGFR)、间皮素或其组合。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗原结合结构域选自单克隆抗体、合成的抗体、人抗体、人源化抗体、单域抗体、抗体单链可变区，以及其抗原结合片段。

8.根据权利要求2-7任一项所述的方法，其中所述CAR包含针对间皮素或表皮生长因子受体(EGFR)的scFv、CD8铰链区、CD28跨膜结构域、CD28共刺激结构域和CD3ζ信号转导结构域，优选地，所述CAR包含针对间皮素的scFv(P4)、CD8铰链区、CD28跨膜结构域、CD28共刺激结构域和CD3ζ信号转导结构域的序列分别如SEQ ID NO:27、29、28、31和30所示。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述CAR包含SEQ ID NO：32所示氨基酸序列。

10.通过权利要求1-9任一项所述的方法制备的经修饰的T细胞。

11.修饰的T细胞，其中与未修饰的T细胞相比，所述T细胞中的抑制性蛋白TIM3和/或PD1的表达被减少或消除。

12.根据权利要求11所述的经修饰的T细胞，其中所述T细胞是包含外源T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)的T细胞。

13.根据权利要求12所述的经修饰的T细胞，其中所述TCR或CAR包含针对肿瘤相关抗原EGFR和/或间皮素的抗原结合结构域。

14.根据权利要求13所述的经修饰的T细胞，其中所述肿瘤相关抗原选自EGFR、间皮素或其组合。

15.根据权利要求13-14任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述抗原结合结构域选自单克隆抗体、合成的抗体、人抗体、人源化抗体、单域抗体、抗体单链可变区，以及其抗原结合片段。

16.根据权利要求12-15任一项所述的经修饰的T细胞，其中所述CAR包含针对间皮素或表皮生长因子受体(EGFR)的scFv、CD8铰链区、CD28跨膜结构域、CD28共刺激结构域和CD3ζ信号转导结构域，优选地，所述CAR包含针对间皮素的scFv(P4)、CD8铰链区、CD28跨膜结构域、CD28共刺激结构域和CD3ζ信号转导结构域的序列分别如SEQ ID NO:27、29、28、31和30所示。

17.根据权利要求16所述的经修饰的T细胞，其中所述CAR包含SEQ ID NO：32所示氨基酸序列。