[发明专利]检测GP1BA基因rs6065位点多态性的人工模拟核酸分子信标与试剂盒

说明书

本发明公开了一种GP1BA基因rs6065位点多态性的分型检测方法与试剂盒。本发明采用GP1BA基因特异性的引物SEQ1和SEQ2扩增GP1BA基因片段，同时在GP1BA基因特异性的引物界定的扩增区域内设计GP1BA基因特异性人工模拟核酸分子信标SEQ3‑FAM和SEQ4‑VIC。本发明提供的基于基因特异性PCR结合人工模拟核酸分子信标判断GP1BA基因rs6065位点多态性的方法不仅准确率高，而且还具有检测速度快、操作简单、结果判读客观、闭管反应污染少等优点，非常适合于在临床中大规模开展。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及GP1BA基因rs6065位点多态性的分型检测方法与试剂盒。

背景技术

高血压是一种以动脉血压持续升高为表象的长期医学病症。高血压通常不会引起症状，然而长期的高血压则是导致冠状动脉疾病、中风、心力衰竭、心房颤动、外周血管疾病、视力丧失、慢性肾病和痴呆的主要风险因素。高血压被分为原发性高血压和继发性高血压，约90~95%的病例是原发性的，是由于不良生活方式和遗传因素导致的。饮食过咸、肥胖、吸烟和饮酒是生活因素中导致血压升高的原因。其余5~10%的病例被归类为继发性高血压，是由于可辨认的原因导致的，例如慢性肾病、肾动脉狭窄、内分泌紊乱或使用避孕药。高血压影响着全球16~37%的人口，仅在美国就约有30%的人群患病。

目前，通过改变生活方式或服用降压药物可以有效降低血压，从而减少并发症的风险。生活方式的改变包括减肥、减少食盐摄入、加强运动锻炼和健康饮食。如果生活方式的改变不足以使血压下降，那就要通过降压药物来控制血压。目前约有70%的高血压患者通过服用降压药物控制血压，然而这需要对每位患者进行多次临床随访和多种药物治疗，从而使得高血压的控制成为一个困难而漫长的过程。

近年来的药物基因组学研究显示，遗传因素在高血压的药物治疗中起着重要的作用。赖诺普利是一种血管紧张素转换酶抑制剂类药物，可以单用或与其它药物合用治疗各种程度的高血压及肾性高血压病。若使用赖诺普利治疗高血压，患者GP1BA基因中的rs6065（C/T）多态性位点将会影响治疗效果。TT型纯合子在治疗后受到心血管疾病、冠心病影响的风险较高。因此，对于那些将药物遗传学研究用于临床以指导抗高血压治疗策略的人来说，确定相关的SNP分型是有重要意义的。

目前，基因多态性检测的方法主要有PCR-Sanger测序法、芯片杂交法、高分辨率溶解曲线法等。这些方法虽然都可以在一定程度上检测基因多态性，但都有不可忽视的局限性。Sanger测序法步骤较多，需要PCR后处理，不仅操作繁琐，还易产生污染，并不能满足临床的需求。芯片杂交法操作繁琐，其检测还依赖于昂贵的设备仪器，导致成本较高。高分辨率溶解曲线法对仪器要求高，需要具有安装高分辨率软件、温度比较敏感的机器才能使用，临床推广存在困难。基于Taqman水解探针的荧光定量PCR，利用Taq酶的外切酶活性，切断探针产生荧光信号，由于Taqman探针荧光基团与淬灭基团并不紧密靠近，导致荧光淬灭不彻底，存在背景荧光信号。此外，Taqman探针对于单碱基错配识别能力较差，极易生成非特异荧光信号，干扰结果判读，进而影响检测的准确性。因此，临床上迫切需要一种简便易行、灵敏度高、准确可靠的检测基因多态性的方法。