[发明专利]一种重离子辐射拟南芥菜基因组靶点的高效标记方法在审
| 申请号： | 201910123642.3 | 申请日： | 2019-02-19 |
| 公开（公告）号： | CN109777882A | 公开（公告）日： | 2019-05-21 |
| 发明（设计）人： | 卞坡;王婷;吴京京 | 申请（专利权）人： | 中国科学院合肥物质科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 合肥市浩智运专利代理事务所(普通合伙) 34124 | 代理人： | 王亚洲 |
| 地址： | 230031 安徽*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重离子辐射 靶点 植物基因组 报告基因 拟南芥菜 同源重组 基因组 侧翼基因组序列 辐射诱变育种 标记效率 机理研究 碱基突变 克隆测序 扩增序列 实验材料 实验操作 高保真 重离子 扩增 损伤 诱导 修复 检测 恢复 | ||
1.一种重离子辐射拟南芥菜基因组靶点的高效标记方法，其特征在于：包括以下步骤：以模式植物拟南芥菜GUS同源重组报告系R3L66为材料，对拟南芥菜进行重离子辐照，待拟南芥菜萌发后提取DNA，对同源重组后序列进行特异性扩增和测序，以报告基因GUS发生同源重组作为高效标记重离子在拟南芥基因组上的作用靶点。
2.根据权利要求1所述的重离子辐射拟南芥菜基因组靶点的高效标记方法，其特征在于：所述拟南芥菜同源重组报告系R3L66为通过在报告基因GUS内部引入完全同源、反向重复内含子片段，构成同源重组的底物序列使报告基因失去活性，报告基因的重组底物序列受到遗传损伤后，通过同源重组修复恢复报告基因的活性。
3.根据权利要求1所述的重离子辐射拟南芥菜基因组靶点的高效标记方法，其特征在于：通过特异性引物对同源重组后序列进行特异性扩增，同源重组后序列包括报告基因同源重组后序列及其侧翼基因序列；扩增序列分为两段，分别为同源重组后PCR扩增子2和同源重组后PCR扩增子1；
所述同源重组后PCR扩增子2的特异性引物为：
正向引物LB-aF:AAAGCCCGACCGTGAAAGTGTCG；
反向引物LB-aR:AGAAGATGAAGAAGAAGCGAATCCCTC；
所述同源重组后PCR扩增子1的特异性引物为：
正向引物RB-aF:TTTCCTCCCAGGGCACTTATCCC；
反向引物RB-aR:AATCAGTTCGGCGACTTTGTCCG。
4.根据权利要求1所述的重离子辐射拟南芥菜基因组靶点的高效标记方法，其特征在于：待拟南芥菜萌发后提取DNA，对同源重组前序列进行特异性扩增和测序，同源重组前序列包括报告基因同源重组前序列及其侧翼基因序列；扩增序列分为两段，分别为同源重组前PCR扩增子2和同源重组前PCR扩增子1；
所述同源重组前PCR扩增子2的特异性引物为：
正向引物RB-aR:AATCAGTTCGGCGACTTTGTCCG；
反向引物LB-aR:AGAAGATGAAGAAGAAGCGAATCCCTC；
所述同源重组前PCR扩增子1的特异性引物为：
正向引物RB-bF:TATTTCAGCCTTGCCTTCACCAAC；
反向引物LB-bF:ATCAAAGTGGAACTGGTCAACG。
5.根据权利要求1所述的重离子辐射拟南芥菜基因组靶点的高效标记方法，其特征在于：采用碳离子对拟南芥菜进行辐照处理。
6.根据权利要求1所述的重离子辐射拟南芥菜基因组靶点的高效标记方法，其特征在于：所述拟南芥菜辐照处理时的状态为种子或小苗。
7.根据权利要求1所述的重离子辐射拟南芥菜基因组靶点的高效标记方法，其特征在于：在拟南芥菜种子或小苗发育的不同生长周期提取DNA。
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