[发明专利]从脾脏细胞中高效分离单个抗原特异性B淋巴细胞的方法有效

专利信息
申请号: 201910125091.4 申请日: 2019-02-20
公开(公告)号: CN110016462B 公开(公告)日: 2020-04-24
发明(设计)人: 娄阳;吴海 申请(专利权)人: 优睿赛思(武汉)生物科技有限公司
主分类号: C12N5/0781 分类号: C12N5/0781
代理公司: 武汉河山金堂专利事务所(普通合伙) 42212 代理人: 胡清堂
地址: 430000 湖北省武汉市东湖开发*** 国省代码: 湖北;42
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 脾脏 细胞 高效 分离 单个 抗原 特异性 淋巴细胞 方法
【权利要求书】:

1.一种从脾脏细胞中高效分离单个抗原特异性B淋巴细胞的方法,所述脾脏细胞为经过普通抗原免疫的脾脏细胞,其步骤如下:

1)利用以生物素标记的CD4单克隆抗体、CD8单克隆抗体和CD14单克隆抗体对脾脏细胞进行负筛选,再利用亲和素磁珠与磁性分离原理去除T淋巴细胞和单核细胞得到CD4、CD8和CD14阴性的脾脏细胞,提高B淋巴细胞的相对丰度;

2)利用荧光标记的IgM多克隆抗体和预标记筛选用抗原,对步骤1得到的脾脏细胞进行进一步负筛选,以流式细胞技术去表面不表达IgG分子的B细胞,保留与预标记筛选抗原结合的目标淋巴细胞;

3)利用7-AAD进行分选,去除死细胞;

4)用流式细胞仪,进行单细胞的筛选,得到目标淋巴细胞;

其中,所述预标记筛选抗原为与小分子荧光染料偶联的普通抗原,所述预标记筛选抗原的制备方法包括以下步骤:采用滴加方式进行偶联反应,分多次将包含亲和素的小分子荧光染料滴加到经生物素标记普通抗原中进行偶联,每次滴加后孵育使其偶联充分;其中包含亲和素的小分子荧光染料的用量为经生物素标记普通抗原的5倍以上。

2.根据权利要求1所述从脾脏细胞中高效分离单个抗原特异性B淋巴细胞的方法,其特征在于:所述预标记筛选抗原为与包含亲和素的小分子荧光染料偶联且经生物素标记的普通抗原。

3.根据权利要求2所述从脾脏细胞中高效分离单个抗原特异性B淋巴细胞的方法,其特征在于:所述预标记筛选抗原的制备方法还包括以下步骤:在包含亲和素的小分子荧光染料和经生物素标记普通抗原偶联完成后,根据偶联产物的大小,选择合适的分子筛离心管,除去未偶联的底物。

4.根据权利要求1所述从脾脏细胞中高效分离单个抗原特异性B淋巴细胞的方法,其特征在于:所述步骤2)中荧光标记的IgM多克隆抗体为FITC标记的IgM多克隆抗体。

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于优睿赛思(武汉)生物科技有限公司,未经优睿赛思(武汉)生物科技有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910125091.4/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top