[发明专利]一种酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒及利用此试剂盒PCR扩增酵母菌菌落的方法在审
| 申请号： | 201910126305.X | 申请日： | 2019-02-20 |
| 公开（公告）号： | CN109837332A | 公开（公告）日： | 2019-06-04 |
| 发明（设计）人： | 周辉 | 申请（专利权）人： | 广州睿辰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 芜湖安汇知识产权代理有限公司 34107 | 代理人： | 尹婷婷 |
| 地址： | 510000 广东省广州市广州高新技术*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 酵母菌 试剂盒 菌落 扩增试剂盒 快速PCR 裂解 细胞壁 酵母菌细胞壁 单克隆菌落 酵母基因组 细胞裂解液 交叉污染 氯仿抽提 释放 煮沸 基因组 假阳性 裂解液 配套的 热启动 上清液 高PH 扩增 加热 毒害 | ||
1.一种酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：10×细胞裂解液、10×PCR反应液、dNTP、热启动Taq酶。
2.根据权利要求1所述的酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述10×细胞裂解液成分为：1L 10×细胞裂解液中含有：10-50mM KOH，0.5-2.5％的十二烷基硫酸钠，20-60％聚乙二醇200。
3.根据权利要求1或2所述的酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述10×细胞裂解液成分优选为：1L 10×细胞裂解液中含有：20mM的KOH，1.5％十二烷基硫酸钠，60％聚乙二醇200。
4.根据权利要求1或2所述的酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述10×PCR反应液成分为：1L 10×PCR反应液中含有：100mM Tris-HCl，500mM KCl，15mM MgCl2，0.01％明胶，0.1％聚乙二醇辛基苯基醚；所述10×PCR反应液的pH为8.3。
5.利用权利要求1-4任意一项所述的酵母菌菌落快速PCR扩增试剂盒PCR扩增酵母菌菌落的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)取酵母菌单菌落培养液；
(2)裂解酵母菌细胞；
(3)酵母菌基因组DNA进行PCR扩增；
(4)PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳，观测扩增结果。
6.根据权利要求5所述的PCR扩增酵母菌菌落的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，PCR扩增反应体系为：10×PCR反应液2.5μL，2.5mM dNTP 2.5μL，10μmol上下游引物1μL，2.5μL上清液，1μL热启动Taq酶，使用双蒸水补至25μL。
7.根据权利要求5所述的PCR扩增酵母菌菌落的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，PCR反应条件为：
8.根据权利要求5所述的PCR扩增酵母菌菌落的方法，其特征在于，所述步骤(4)中具体包括：配制1％琼脂糖凝胶，将PCR扩增液加至加样孔内，接通电泳仪电源，电泳参数：70V，30min，然后在紫外显影仪上观测扩增结果。
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