[发明专利]一种含有CHG成分的湿巾产品中微生物限度的检测方法

权利要求书

1.一种含有CHG成分的湿巾产品中微生物限度的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S1，取湿巾样品加入到缓冲液中，制备供试液；

步骤S2，将供试液采用滤膜过滤，并采用缓冲液对滤膜进行冲洗，检测滤液中的需氧菌总数和霉菌酵母菌总数；

步骤S3，取步骤S1中的供试液制备初增菌液A，检测初增菌液A中的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌以及铜绿假单胞菌；

步骤S4，取步骤S1中的供试液制备初增菌液B，检测初增菌液B中的沙门氏菌；

其中，所述缓冲液为含有质量分数为0.5％吐温-80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S1具体操作如下，剪取10g样品置于无菌三角瓶中，并加入90ml缓冲液，将无菌三角瓶置于摇床上摇匀，得到质量体积比为1:10的供试液。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S2具体操作如下，取1ml 1:10供试液通过膜过滤器过滤，再取100ml无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液进行过滤冲洗，取一次过滤膜贴于大豆-酪蛋白消化物琼脂平板，将所述平板置于30-35℃培养箱中培养3-5天，用于检测需氧菌总数，取另一次过滤膜贴于沙氏葡萄糖琼脂平板，将所述平板置于20-25℃培养箱中培养5-7天，用于检测霉菌酵母菌总数。

4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S3中，初增菌液A的制备方法为，取10ml1:10的供试液至100ml大豆-酪蛋白消化物肉汤(TSB)中，在30-35℃条件下培养18-24小时，即得初增菌液A，所述大豆-酪蛋白消化物肉汤(TSB)中含有质量分数为0.7％卵磷脂。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S3中，初增菌液A中的金黄色葡萄球菌的检测方法为，用接种环从初增菌液A中挑取一环至甘露醇氯化钠琼脂(MSA)上涂匀，30-35℃倒置培养18-72小时；若MSA平板上有黄色菌落或外周有黄色环的白色菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，确证是否为金黄色葡萄球菌；若平板上没有与前述形态特征相符或疑似的菌落生长，或虽有相符或疑似的菌落生长但革兰氏染色鉴定结果为阴性，判断供试品未检出金黄色葡萄球菌。

6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S3中，初增菌液A中的大肠埃希菌的检测方法为，取1ml初增菌液A中挑取一环至麦康凯琼脂培养基(MCA)上涂匀，在42℃-44℃再培养18-72小时；若MCA中菌落呈黑紫色，有金属光泽，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，确证是否为大肠埃希菌；若没有菌落生长，或虽有菌落生长但革兰氏染色鉴定结果为阳性，判断供试品未检出大肠埃希菌。

7.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S3中，初增菌液A中的铜绿假单胞菌的检测方法为，用接种环从初增菌液A中挑取一环至十六烷基三甲基溴化铵(CM)培养基平板上，在30℃-35℃条件下培养18-72小时；若CM上菌落或菌落周围呈蓝绿色，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，确证是否为铜绿假单胞菌；若没有菌落生长，或虽有菌落生长但革兰氏染色鉴定结果为阳性，判供试品未检出铜绿假单胞菌。

8.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S4的操作如下，取100ml的1:10供试液过滤后，将滤膜放至100ml TSB中，在30-35℃条件下培养18-24小时，即得初增菌液B，取0.1ml的初增菌液B至10mlRVS肉汤培养基中，在30℃-35℃条件下培养18-24小时，用接种环从RVS肉汤中挑取一环至木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂培养基(XLD)培养基平板上，在30℃-35℃条件下培养18-48小时；若XLD平板上出现有生长良好的红色菌落，带有或没有黑色中心，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，确证是否为沙门氏菌；若没有菌落生长，或虽有菌落生长但革兰氏染色鉴定结果为阳性，判断供试品未检出沙门氏菌。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S2-S4中还设置有阴性对照。