[发明专利]一种快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法

权利要求书

1.一种快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：采用混合酸酐法将甘胆酸与卵清蛋白进行偶联，透析纯化后得到包被抗原；

S2：将得到的包被抗原通过NHS/EDC法偶联到富含羟基的葡聚糖基质的CM5芯片上，并对未反应的活性位点进行封闭；

S3：利用CM5芯片对甘胆酸进行检测。

2.根据权利要求1所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，S1中混合酸酐法的过程如下：甘胆酸和(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶于水中，加入N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌过夜后加入到含有卵清蛋白的磷酸缓冲盐溶液，搅拌反应，透析纯化即得包被抗原。

3.根据权利要求2所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，所述甘胆酸和卵清蛋白的质量比为1:4~7；所述甘胆酸和(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的质量比为1:0.5~1；所述甘胆酸和N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1:1~2。

4.根据权利要求1所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，所述搅拌的温度为4℃。

5.根据权利要求1所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，S2中NHS/EDC法包括如下步骤：

S201：包被抗原在CM5芯片上的预富集；

S202：CM5芯片上的葡聚糖羧基的活化；

S203：卵清蛋白的氨基和检测基质的羧基偶联；

S204：利用乙醇胺封闭未反应的活性位点。

6.根据权利要求1所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，

S201的具体过程为：将包被抗原溶于不同pH的醋酸钠缓冲液，以10 μL/min的流速流经CM5芯片，然后用NaOH溶液洗脱，4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸缓冲液冲洗回复基线；

S202的具体过程为：EDC溶液和NHS溶液分别以10~30 μL/min的流速通过CM5芯片，以活化葡聚糖上的羟基；

S203的具体过程为：将包被抗原溶于pH为4.0的醋酸钠缓冲液中，以10 μL/min的流速通过芯片，实现卵清蛋白的氨基和检测基质的羧基偶联；

S204的具体过程为：利用1 mol/L的乙醇胺溶液对未反应的活性位点进行封闭。

7.根据权利要求6所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，S201中所述包被抗原的浓度为0.05 mg/mL；所述醋酸钠缓冲液的pH为4.0、4.5、5.0和5.5，每个pH的醋酸钠缓冲液流经CM5芯片的时间为2 min；所述NaOH溶液的浓度为50 mmol/L。

8.根据权利要求6所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，S202中EDC溶液的浓度为100~400 mmol/L；所述NHS溶液的浓度为100~400 mmol/L。

9.根据权利要求1所述快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，其特征在于，S3步骤前还包括建立甘胆酸的表面等离子共振分析的标准曲线的步骤。