[发明专利]一种快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法

说明书

本发明涉及一种快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法。所述方法包括如下步骤：S1：采用混合酸酐法将甘胆酸与卵清蛋白进行偶联，透析纯化后得到包被抗原；S2：将得到的包被抗原通过NHS/EDC法偶联到富含羟基的葡聚糖基质的CM5芯片上，并对未反应的活性位点进行封闭；S3：利用CM5芯片对甘胆酸进行检测。该方法直接利用甘胆酸偶联卵清蛋白形成检测受体，与甘胆酸小分子进行抗甘胆酸多克隆抗体竞争，通过在金膜上结合形成的竞争信号的差异来的对甘胆酸进行定量分析，可实现自动化，实时检测，更加直观反映甘胆酸含量水平，特异性高，灵敏度好，单个样检测时间在10 min内，具有快速、准确、可靠的优点。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法。

背景技术

肝细胞受损并积累引起肝脏疾病，检测肝细胞受损程度并对肝功能进行实时评价，对于早期诊断、预防和治疗肝脏疾病具有重要意义。甘胆酸是胆汁酸的主要成分之一，由胆固醇与肝内的甘氨酸结合而成，其含量的测定对肝病诊断较具敏感性，是评价肝脏功能的一项很重要的指标。相关研究指出，胆汁酸经肾脏排泄很明显，并与肝胆疾病程度相关，因此检测尿液中的甘胆酸对临床有一定指导价值。

甘胆酸的常用检测方法主要是仪器方法，如薄层荧光法、高效液相色谱法，高效液相色谱法-串联质谱法以及超高效液相色谱质谱方法，这些方法需要大型仪器和复杂的样品前处理；另一方面是免疫法，主要包括放射免疫法、化学发光免疫法及免疫透射比浊法，但放射免疫法需要处理特异性的放射性元素，相关结果解读或者配套仪器也比较复杂，不适合家庭、个人及医院内。

因此，开发一种操作简单，适用范围广的检测甘胆酸的方法具有重要的研究意义和应用价值。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中甘胆酸的检测方法需要大型仪器和复杂的样品前处理，操作复杂，不适合家庭、个人及医院的缺陷和不足，提供一种快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法。本发明提供的方法直接利用甘胆酸偶联卵清蛋白形成检测受体，与甘胆酸小分子进行抗甘胆酸多克隆抗体竞争，通过在金膜上结合形成的竞争信号的差异来的对甘胆酸进行定量分析，可实现自动化，实时检测，更加直观反映甘胆酸含量水平，特异性高，灵敏度好，IC50为71.6 ng/mL，线性范围为：6.3-817.2 ng/mL，单个样检测时间在10 min内，具有快速、准确、可靠的优点。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种快速检测甘胆酸的表面等离子共振分析方法，包括如下步骤：

S1：采用混合酸酐法将甘胆酸与卵清蛋白进行偶联，透析纯化后得到包被抗原；

S2：将得到的包被抗原通过NHS/EDC法偶联到富含羟基的葡聚糖基质的CM5芯片上，并对未反应的活性位点进行封闭；

S3：利用CM5芯片对甘胆酸进行检测。

本发明提供的方法直接利用甘胆酸偶联卵清蛋白形成检测受体，与甘胆酸小分子进行抗甘胆酸多克隆抗体竞争，通过在金膜上结合形成的竞争信号的差异来的对甘胆酸进行定量分析，可实现自动化，实时检测，更加直观反映甘胆酸含量水平，特异性高，灵敏度好，IC50为71.6 ng/mL，线性范围为：6.3-817.2 ng/mL，单个样检测时间在10 min内，具有快速、准确、可靠的优点。

优选地， S1中混合酸酐法的过程如下：甘胆酸和(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶于水中，加入N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌过夜后加入到含有卵清蛋白的磷酸缓冲盐溶液，搅拌反应，透析纯化即得包被抗原。

更为优选地，所述甘胆酸和卵清蛋白的质量比为1:4~7。

更为优选地，所述甘胆酸和(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的质量比为1:0.5~1。