[发明专利]黄颡鱼杆菌样病毒全基因组克隆方法在审
| 申请号： | 201910128137.8 | 申请日： | 2019-02-21 |
| 公开（公告）号： | CN109735534A | 公开（公告）日： | 2019-05-10 |
| 发明（设计）人： | 魏永伟;章晓栋;刘晓瑜;徐昊;沈丹娜;孟程唯 | 申请（专利权）人： | 绍兴文理学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806;C12R1/93 |
| 代理公司： | 绍兴市越兴专利事务所(普通合伙) 33220 | 代理人： | 蒋卫东 |
| 地址： | 312000 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 黄颡鱼 杆菌 病毒全基因组 克隆 特异性引物 病毒RNA 反转录 分子流行病学 生物技术领域 病毒基因组 分子生物学 反应条件 引物序列 致病机制 扩增 引物 分段 病毒 调查 研究 | ||
1.一种黄颡鱼杆菌样病毒全基因组克隆的方法，其特征在于，方法的步骤为：
（1）黄颡鱼杆菌样病毒全基因组克隆引物的设计；
（2）黄颡鱼杆菌样病毒RNA的抽提；
（3）黄颡鱼杆菌样病毒全基因组cDNA反转录体系和反应条件；
（4）黄颡鱼杆菌样病毒全基因组PCR体系和反应条件；
（5）黄颡鱼杆菌样病毒全基因组测序。
2.根据权利要求1所述的黄颡鱼杆菌样病毒全基因组克隆方法，其特征在于，所述引物包括用于反转录的14条引物P1-R、P2-R、P3-R、P4-R、P5-R、P6-R、P7-R、P8-R、P9-R、P10-R、P11-R、P12-R、P13-R和P14-R，以及用于PCR的14对引物P1-F/P1-R、P2-F/P2-R、P3-F/P3-R、P4-F/P4-R、P5-F/P5-R、P6-F/P6-R、P7-F/P7-R、P8F/P8-R、P9-F/P9-R、P10-F/P10-R、P11-F/P11-R、P12-F/P12-R、P13-F/P13-R和P14-F/P14-R，引物序列长度为20--22bp。
3.根据权利要求1所述的黄颡鱼杆菌样病毒全基因组克隆方法，其特征在于，所述的黄颡鱼杆菌样病毒RNA的抽提，采用权利要求2所述的引物进行反转录及PCR，PCR产物进行纯化回收后连接测序载体进行测序。
4.根据权利要求3所述的黄颡鱼杆菌样病毒全基因组克隆方法，其特征在于，扩增的产物大小其中13个片段大小为2000bp，一个片段大小为1000bp，14个片段含盖黄颡鱼杆菌样病毒全基因组全部序列。
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