[发明专利]一种玻璃化冷冻试剂和玻璃化解冻试剂及其应用和使用方法

权利要求书

1.一种玻璃化冷冻试剂，包括冷冻前平衡液和冷冻液，

冷冻前平衡液组成成分为：乙二醇、二甲基亚砜、人血清白蛋白、庆大霉素、磷酸盐缓冲液；

玻璃化冷冻液组成成分：蔗糖、乙二醇、二甲基亚砜、人血清白蛋白、庆大霉素、磷酸盐缓冲液。

2.根据权利要求1所述的玻璃化冷冻试剂，其特征在于：

冷冻前平衡液以磷酸盐缓冲液为基础溶液，所含成分为：体积百分比浓度为16-25％的人血清白蛋白、体积百分比浓度为6-15％乙二醇、体积百分比浓度为6-15％二甲基亚砜和6-15ug/ml庆大霉素；

冷冻液以磷酸盐缓冲液为基础溶液，所含成分为：体积百分比浓度为16-25％人血清白蛋白、体积百分比浓度为16-25％乙二醇、体积百分比浓度为16-25％二甲基亚、质量百分比为0.35-0.45M蔗糖和6-15ug/ml庆大霉素。

3.权利要求1所述玻璃化冷冻试剂用于冷冻人或动物卵裂期胚胎的应用。

4.权利要求1所述玻璃化冷冻试剂的使用方法，将胚胎从正常的培养液中转移至冷冻前平衡液中，静置4～5分钟，然后转至冷冻液中，将带有少量冷冻液的胚胎转入冷冻载体中，并立即投入液氮中；从进入冷冻液到投入液氮中的时间在30～40秒内。

5.一种对权利要求1或2所述玻璃化冷冻试剂冷冻产品进行解冻的玻璃化解冻试剂，其特征在于：包括解冻液I、解冻液II、解冻液III和解冻液Ⅳ；解冻液I、解冻液II、解冻液III组成成分：蔗糖、人血清白蛋白、庆大霉素、磷酸盐缓冲液；解冻液Ⅳ组成成分为：人血清白蛋白、庆大霉素、磷酸盐缓冲液。

6.根据权利要求5所述的玻璃化解冻试剂，其特征在于：

解冻液I以磷酸盐缓冲液为基础溶液，各组分浓度分别为：0.8-1.2M的蔗糖、16-25％人血清白蛋白、6-15ug/ml庆大霉素；

解冻液II以磷酸盐缓冲液为基础溶液，各组分浓度分别为：0.2-0.3的蔗糖、16-25％人血清白蛋白、6-15ug/ml庆大霉素：

解冻液III以磷酸盐缓冲液为基础溶液，各组分浓度分别为0.1-0.15M的蔗糖、16-25％人血清白蛋白、6-15ug/ml庆大霉素；

解冻液Ⅳ以磷酸盐缓冲液为基础溶液，各组分浓度分别为16-25％人血清白蛋白和6-15ug/ml庆大霉素。

7.根据权利要求1所述的玻璃化冷冻试剂或权利要求5所述的玻璃化解冻试剂，其特征在于：每1000ml磷酸盐缓冲液配方包含以下组分：

氯化钠 8.0g

氯化钾 0.2g

磷酸氢二钠 1.15g

磷酸二氢钾 0.2g

氯化钙 0.1g

氯化镁 0.1g

葡萄糖 1.0g

丙酮酸钠 36mg。

8.权利要求6所述玻璃化解冻试剂用于冷冻人或动物卵裂期胚胎解冻的应用。

9.权利要求6所述玻璃化解冻试剂的使用方法，将胚胎迅速从液氮中取出，待观察到冷冻载体的胚胎和少量冻存液已经由固态融化为小液滴时，将带有胚胎的冷冻载体投入到解冻液I中，使胚胎从冷冻载体中分离下来，胚胎在解冻液I中停留5分钟，转入解冻液II中停留2～3分钟，转入解冻液III中停留1～2分钟，后转入解冻液Ⅳ中清洗后即可转入胚胎培养液中，放入37°的二氧化碳培养箱中培养等待移植。

10.根据权利要求9所述的使用方法，其特征在于：操作均在37°下，在百级净化区内，在体式显微镜下操作。