[发明专利]一种玻璃化冷冻试剂和玻璃化解冻试剂及其应用和使用方法

说明书

本发明涉及冷冻及解冻技术领域，具体涉及一种玻璃化冷冻试剂和玻璃化解冻试剂及其应用和使用方法。本申请提供了一种冷冻时间和解冻时间短，便于操作和避免对胚胎损伤的玻璃化冷冻试剂和玻璃化解冻试剂。本专利冷冻和解冻方法较之目前的进口试剂比较，具有如下的优势:①冷冻时间和解冻时间均有缩短，提高了工作效率；②冷冻试剂溶质浓度合理，使得胚胎易于从冷冻载体上脱离下来，避免了对胚胎的过多操作和损伤；③解冻液的工作温度是37°，解冻过程中可以在一个工作台面连续进行，不必更换工作台，简化方便了操作流程，避免差错发生。

技术领域

本发明涉及冷冻及解冻技术领域，具体涉及一种玻璃化冷冻试剂和玻璃化解冻试剂及其应用和使用方法。

背景技术

随着不孕人群的增加、二胎政策的开放和辅助生殖技术的发展，我国的试管婴儿治疗量(周期数)逐年增加。中国医师协会生殖医学专业委员会主任委员乔杰院士根据我国的辅助生殖技术发展，预测我国的试管婴儿治疗量(周期数)能达到每年40万例。

胚胎冷冻保存和解冻复苏技术是人类辅助生殖技术(体外受精和胚胎移植技术，俗称试管婴儿)领域中一项重要的技术。胚胎冷冻保存技术是指将人类胚胎通过一定的技术操作，包括转移至特制的系列溶液中，同时调节胚胎温度，最终将胚胎承载在特制的冷冻载体中转入-196°的液氮中。胚胎解冻技术是指将已经冻存在液氮中的人类胚胎，通过一定的技术操作，包括将胚胎从冷冻载体中转移至系列的溶液中，同时调节胚胎温度，最终将胚胎放入正常的培养液中，转入37°的二氧化碳培养箱中，等待移植使用。

目前的体外受精周期中约有60-70％的患者有胚胎需要冻存。冻存胚胎的目的：部分患者是因为有富裕的胚胎，这部分富裕的胚胎冷冻起来，以备患者本次治疗不成功或准备再生育时解冻再移植，提高了累积妊娠率；部分患者是出现了不能新鲜胚胎移植的病理情况，例如出现了卵巢过度刺激综合征、阴道异常出血或突发其他疾病等情况，可以将胚胎冷冻起来，以备患者病理情况消除后再行解冻移植；越来越多的研究表明，解冻胚胎移植有着较高的妊娠成功率和较好的妊娠结局，有的专家或有的助孕中心提倡不移植新鲜胚胎而将全部胚胎冷冻保存，后期做解冻胚胎移植。

综上所述，胚胎冷冻保存和解冻复苏技术的应用会越来越多，成为助孕技术中非常重要的治疗手段，其重要性会更加受到关注。

在胚胎冷冻和解冻过程中，伴随温度的变化，特制的化学试剂对胚胎的保护作用最为重要。胚胎冷冻试剂：在降温过程中，会形成冰晶损胚胎，冷冻保护剂会保护胚胎。胚胎解冻试剂：在复温过程中，也需要保护剂保护胚胎。

国内医疗行业使用的耗材试剂实行医疗注册证制度，目前国内助孕行业中“有证”的胚胎冷冻和胚胎解冻复苏的试剂只有进口的试剂(日本加藤的试剂)，没有国产试剂。

发明内容

为了解决以上问题，本申请提供了一种冷冻时间和解冻时间短，便于操作和避免对胚胎损伤的玻璃化冷冻试剂和玻璃化解冻试剂。

本发明提供了一种玻璃化冷冻试剂，包括冷冻前平衡液和冷冻液，

冷冻前平衡液组成：以磷酸盐缓冲液(DPBS)为基础溶液，所含成分为：乙二醇(EG)、二甲基亚砜(DMSO)、人血清白蛋白(HSA)、庆大霉素；

玻璃化冷冻液组成成分：以磷酸盐缓冲液为基础溶液，所含成分为：蔗糖(Sucrose)、乙二醇、二甲基亚砜、人血清白蛋白、庆大霉素。

其中，冷冻前平衡液的各组分浓度分别为：16-25％人血清白蛋白(体积百分比)、6-15％乙二醇(体积百分比)、6-15％二甲基亚砜(体积百分比)和6-15ug/ml庆大霉素(质量百分比)；冷冻液的各组分浓度分别为：16-25％人血清白蛋白(体积百分比)、16-25％乙二醇(体积百分比)、16-25％二甲基亚砜(体积百分比)、0.35-0.45M蔗糖(质量百分比)和6-15ug/ml庆大霉素(质量百分比)。