[发明专利]一种产壳聚糖酶的重组菌的构建方法及其应用有效
| 申请号： | 201910128764.1 | 申请日： | 2019-02-21 |
| 公开（公告）号： | CN109652437B | 公开（公告）日： | 2021-12-07 |
| 发明（设计）人： | 江正强;马帅;杨绍青;刘翊昊;闫巧娟 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/56;C12N9/42;C12N15/31;C12P19/14;C12P19/26 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 100083 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 聚糖 重组 构建 方法 及其 应用 | ||
1.一种产壳聚糖酶的重组菌的构建方法，包括如下步骤：将枯草芽孢杆菌壳聚糖酶基因和透明颤菌血红蛋白基因导入毕赤酵母，得到所述产壳聚糖酶的重组菌；
所述枯草芽孢杆菌壳聚糖酶基因为序列1所示的DNA分子；
所述透明颤菌血红蛋白基因为序列2所示的DNA分子。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌壳聚糖酶基因通过重组表达载体pPICZA-BsCsn46导入所述毕赤酵母中；
所述透明颤菌血红蛋白基因通过重组表达载体pPIC3.5K-VHb导入所述毕赤酵母中；
所述重组表达载体pPICZA-BsCsn46为将序列1所示的DNA分子替换pPICZA载体EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点间的小片段后得到的载体；
所述重组表达载体pPIC3.5K-VHb为将序列2所示的DNA分子替换pPIC3.5K载体EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点间的小片段后得到的载体。
3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于：所述毕赤酵母为巴斯德毕赤酵母。
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：所述巴斯德毕赤酵母为巴斯德毕赤酵母GS115。
5.采用权利要求1-4任一所述的构建方法构建得到的产壳聚糖酶的重组菌。
6.权利要求5所述的重组菌在制备壳聚糖酶中的应用。
7.一种壳聚糖酶的制备方法，包括如下步骤：将采用权利要求1-4任一所述的构建方法构建得到的产壳聚糖酶的重组菌进行发酵培养，得到发酵产物，从所述发酵产物中制得壳聚糖酶。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述发酵培养的方法包括如下步骤：
1）将权利要求1-4任一所述的构建方法构建得到的产壳聚糖酶的重组菌接种至种子培养基中，培养至OD600为8-12时，得到种子液；
2）将所述种子液接种至含有甘油的发酵培养基中进行发酵培养，待培养体系中甘油耗尽时开始流加甘油溶液；
3）待培养体系中菌体湿重达到200-250 g/L时停止流加甘油溶液，饥饿菌株20-40 min后开始流加甲醇溶液进行诱导培养。
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