[发明专利]一种基于圆盘状毛细管微阵列的多重核酸检测方法

说明书

本发明公开一种新的基于圆盘状毛细管微阵列的可视化多重核酸检测方法，所述方法为利用PDMS基座制作、毛细管组装、亲疏水处理等方式加工出微阵列，内含亲水性圆盘状微管道，阵列的外表面采用化学方法进行超疏水性修饰，可将若干组核酸扩增引物分别加入不同毛细管中并干燥固定，然后利用圆盘状毛细管微阵列的中心圆孔通过虹吸方式将核酸扩增反应组分一次性引入各微管道中，放入温控装置中进行扩增反应，通过观察毛细管通道内的荧光信号实现检测，本发明可在一次反应中快速方便地实现对多个核酸靶标的检测，同时该毛细管微阵列可进一步扩展实现更多通量的检测。

技术领域

本发明涉及生物医学领域的检测方法，具体涉及一种基于圆盘状毛细管微阵列的多重核酸检测方法。

背景技术

近年来，多重核酸检测(nucleic acids detection,NAT)由于成本低、时间短、操作便捷等优势在很多领域得到了广泛的应用，如临床诊断、转基因检测、微生物监测、法医检验领域等，特别是对于现场实时检测(POCTs)发挥了很大的作用(Yager,P.,et al.,2008, Annu.Rev.Biomed.Eng.,10,107-144；Guo,J.,et al.,2011, Anal.Chem.,83(5),1579-1586；Sciancalepore,A.G.,et al., 2013,Food Microbial.,35(1),10-14；Estes,M.D.,et al.,2012, Analyst,137(23),5510-5519；Niemz,A.,et al.,2011,TrendsBiotechnol.,29(5),240-250)。

在核酸扩增分析中，环介导等温扩增(loop-mediated isothermalamplification,LAMP)因其灵敏度高、特异性强、效率高，对专业设备要求低等特点而被广泛应用(Notomi,T.,et al., 2000,Nucleic Acids Res.,28(12),e63-e63)，在过去的十年中， LAMP方法与不同系统比如微流控和毛细管等系统整合在一起，为开发多重检测平台提供了巨大的潜力，与常规检测方法相比，微流控技术或毛细管技术可以结合核酸扩增分析、免疫分析和细胞操作的过程，并将反应过程整合在很小的芯片或毛细管中。这种微型反应系统有助于开发更加智能化、自动化的分析系统，并且密封性良好，以减少交叉污染的机会及手动步骤，以此来实现一个快速、多元化并易于操作的分析系统(McCalla,S.E.,et al.,2011,Annu.Rev.Biomed. Eng.,13,321-343；Asiello,P.J.,et al.,2011,Lab Chip, 11(8):1420)。