[发明专利]一种增强向肿瘤部位迁移的嵌合抗原受体载体构建方法与应用

说明书

本发明提供了表达CXCR3的CAR‑NK92细胞、制备方法及其应用。具体地，本发明提供了一种工程化的免疫细胞，所述工程化的免疫细胞表达靶向NKG2DL的嵌合抗原受体CAR和CXCR3。CXCR3不仅可以帮助靶向NKG2DL的CAR‑NK细胞向肿瘤细胞的迁移，还可以提高靶向NKG2DL的CAR‑NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。尤其是本发明表达含有NKG2D胞外区的CAR和CXCR3的NK细胞，能够有效地杀伤肿瘤细胞，显著提高疗效和减少复发和副作用。

技术领域

本发明涉及肿瘤的细胞免疫治疗领域。具体地，本发明涉及表达CXCR3的 CAR-NK92细胞，及其制备方法和应用。

背景技术

细胞免疫治疗是一种新兴的、具有显著疗效的肿瘤治疗模式，是一种自身免疫抗癌的新型治疗方法。近些年，嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法在治疗白血病取得了显著的效果。

然而CAR-T也带来了很多副反应，比如细胞因子风暴，脱靶效应。此外，CAR-T 对实体瘤治疗效果不佳。NK细胞作为固有免疫细胞，能够快速发挥细胞毒性抵抗肿瘤细胞或病毒感染的细胞。NK相比T细胞有许多免疫优势：NK细胞不受HLA限制；NK细胞还可通过CD16与抗体Fc片段结合，诱发ADCC(抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用)的特异性杀伤作用；NK细胞很少产生细胞因子风暴。

虽然CAR-T和CAR-NK在血液瘤取得了很好的治疗效果，然而对实体瘤治疗效果不佳。尤其肿瘤微环境的阻碍，免疫细胞很难浸润到微环境中发挥功能。因此，如何克服CAR-T和CAR-NK技术的弊端以及如何能赋予免疫细胞对实体瘤细胞的精准识别与特异杀伤，成为免疫细胞治疗亟待解决的问题。

因此，本领域迫切需要开发出一种能够更高效地向肿瘤部位迁移的、特异性好、副作用小地治疗肿瘤的细胞免疫技术。

发明内容

本发明的目的就是提供一种能够更高效地向肿瘤部位迁移的、特异性好、副作用小地治疗肿瘤的细胞免疫技术。

本发明的主要目的是提供一种制备表达CXCR3的CAR-NK92细胞的方法，得到的CAR-NK92细胞可以特异性的识别NKG2DL阳性的肿瘤细胞，同时CAR-NK92 表达的趋化因子受体CXCR3可以帮助CAR-NK92细胞向肿瘤细胞的迁移和提高 CAR-NK92细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，可在制备和治疗肿瘤的药物中进行应用。

在本发明的第一方面，提供了一种工程化的免疫细胞，所述工程化的免疫细胞表达靶向NKG2DL的嵌合抗原受体CAR和趋化因子受体。

在另一优选例中，所述免疫细胞为NK细胞或T细胞，较佳地为NK细胞，更佳地为NK92细胞。

在另一优选例中，所述嵌合抗原受体CAR定位于所述免疫细胞的细胞膜。

在另一优选例中，所述嵌合抗原受体CAR含有靶向NKG2DL的抗原结合结构域。

在另一优选例中，所述嵌合抗原受体CAR的结构如式II示：

L-S-B-T (II)

式中，

“-”为连接肽或肽键；

L为无或信号肽序列；

S为靶向NKG2DL的抗原结合结构域；

B为无或MYC标签；

T为信号传导结构域。

在另一优选例中，所述L为选自下组的蛋白来源的信号肽：CD8、GM-CSF，或其组合。

在另一优选例中，所述L为CD8α信号肽。

在另一优选例中，所述CD8α信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。