[发明专利]一种制备高纯度金丝桃素的方法

权利要求书

1.一种制备高纯度金丝桃素的方法，其特征在于具体方法步骤如下：

（1）制备贯叶连翘提取物粗液

以市售贯叶连翘提取物为原料，按照贯叶连翘提取物的质量︰体积分数为10～40%乙醇溶液的体积比为1 g︰100～200 mL的比例，将贯叶连翘提取物加入到乙醇溶液中，搅拌均匀后，再泵入澄清型管式离心机中，在转速为8000～10000r/min的条件下，进行离心，分别收集离心清液和沉渣；对于收集的离心清液，即为贯叶连翘提取物粗液，用作下一步处理；

（2）制备低纯度金丝桃素洗脱液

第（1）步完成后，首先将市售已活化的XAD7HP树脂或XAD16N树脂或SP700树脂分散于纯化水中，然后装于层析柱，使树脂体积达到层析柱体积的60～80%，再用与层析柱等体积的纯化水进行反冲，排出层析柱中树脂间的气泡，即装配出吸附树脂层析柱，备用；

再按照吸附树脂层析柱︰第（1）步收集的贯叶连翘提取物粗液的体积比为1︰10～30的比例，将贯叶连翘提取物粗液泵入吸附树脂层析柱中，控制贯叶连翘提取物粗液的泵入速度为吸附树脂层析柱体积的1～3倍/小时；吸附结束后，分别收集上柱流出液和荷载金丝桃素的吸附树脂层析柱；对于收集的荷载金丝桃素的吸附树脂层析柱，按照荷载金丝桃素的吸附树脂层析柱︰体积分数为60～80%乙醇溶液的体积比为1︰2～4的比例，在乙醇溶液的泵入速度为荷载金丝桃素的吸附树脂层析柱体积的2～4倍/小时下，进行金丝桃素洗脱；洗脱结束后，分别收集洗脱流出液和洗脱后的吸附树脂层析柱；对于收集的洗脱流出液，即为低纯度金丝桃素洗脱液，用作下一步处理；对于收集的洗脱后的吸附树脂层析柱，泵入2～4倍于洗脱后的吸附树脂层析柱体积的纯化水进行清洗，纯化水的泵入速度为洗脱后的吸附树脂层析柱体积的3～5倍/小时；清洗结束后，分别收集过柱清洗液和清洗后的吸附树脂层析柱；

（3）制备低纯度金丝桃素浓缩液

第（2）步完成后，将第（2）步收集的低纯度金丝桃素洗脱液泵入反渗透浓缩器中，在0.20～0.40MPa下，进行反渗透浓缩，直到反渗透截留液的体积减少至原体积的5～10%为止，分别收集反渗透透过液和反渗透截留液；对于收集的反渗透截留液，即为低纯度金丝桃素浓缩液，金丝桃素纯度为65.7～69.2%，用作下一步处理；

（4）制备高纯度金丝桃素流出液

第（3）步完成后，按照0.05～0.15mol/L磷酸二氢钠溶液︰甲醇︰乙腈的体积比为1︰2～3︰3～4的比例，将磷酸二氢钠溶液、甲醇、乙腈混合均匀，收集混合液，即为流动相，备用；将市售Acchrom C18-7μm-100Å制备色谱填料或SiliaSphere C18-10μm-60Å制备色谱填料或SPS C18-10μm-100Å制备色谱填料，分散于无水乙醇中，并装配成制备色谱柱，备用；

再按照第（3）步收集的低纯度金丝桃素浓缩液︰制备色谱柱的体积比为1︰8～10的比例，将低纯度金丝桃素浓缩液以流速为制备色谱柱体积的15～20倍/小时的速度泵入制备色谱柱中，进行吸附上样；上样结束后，在检测波长为590nm，流动相流速为制备色谱柱体积的15～20倍/小时的条件下，将流动相泵入制备色谱柱中，进行洗脱制备，根据色谱图收集金丝桃素特征峰形处流出液；洗脱结束后，分别收集金丝桃素流出液、制备色谱洗脱液和洗脱后的制备色谱柱；对于收集的金丝桃素流出液，即为高纯度金丝桃素流出液，用作下一步处理；

（5）制备高纯度金丝桃素

第（4）步完成后，将第（4）步收集的高纯度金丝桃素流出液泵入反渗透浓缩器中，在0.15～0.25MPa下，进行反渗透浓缩，直到反渗透截留液的体积减少至原体积的10～15%为止，分别收集反渗透透过液和反渗透截留液；对于收集的反渗透截留液，于-21℃下预冻2～4h，放置于冷冻干燥装置中，在10～20Pa、-50～-60℃下，进行冷冻干燥24～36h，就制备得到高纯度金丝桃素产品，纯度为98.2～98.7%，收率为70.1～75.8%。