[发明专利]组织DNA中马兜铃酸I-DNA加合物的检测和相对定量方法

权利要求书

1.一种组织DNA中马兜铃酸I-DNA加合物的检测和相对定量方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、马兜铃酸I-DNA加合物的制备和鉴定；

B、将组织DNA进行酶解；

C、采用步骤A制得的马兜铃酸I-DNA加合物作为标准品，对步骤B获得的DNA酶解产物进行检测和相对定量。

2.根据权利要求1所述的组织DNA中马兜铃酸I-DNA加合物的检测和相对定量方法，其特征在于，步骤A中，所述兜铃酸I-DNA加合物的制备步骤如下：将脱氧腺苷和马兜铃酸I溶于磷酸钾溶液中，加入锌粉，避光反应，即得兜铃酸I-DNA加合物。

3.根据权利要求2所述的组织DNA中马兜铃酸I-DNA加合物的检测和相对定量方法，其特征在于，所述脱氧腺苷与磷酸钾溶液的固液比为2:1；所述马兜铃酸I与磷酸钾溶液的固液比为1:1；所述磷酸钾溶液的浓度为50mM，pH值为5.8。

4.根据权利要求2所述的组织DNA中马兜铃酸I-DNA加合物的检测和相对定量方法，其特征在于，所述避光反应的温度为37℃、反应时间为16h。

5.根据权利要求1所述的组织DNA中马兜铃酸I-DNA加合物的检测和相对定量方法，其特征在于，步骤A中，所述鉴定采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱进行。

6.根据权利要求1所述的组织DNA中马兜铃酸I-DNA加合物的检测和相对定量方法，其特征在于，步骤B中，所述酶解的方法具体包括以下步骤：

B1、提取组织DNA；

B2、采用脱氧核糖核酸酶I、核酸酶P1、碱性磷酸酶和磷酸二酯酶I对组织DNA进行酶解。

7.根据权利要求6所述的组织DNA中马兜铃酸I-DNA加合物的检测和相对定量方法，其特征在于，步骤B2中，加入所述脱氧核糖核酸酶I进行酶解的条件为：37℃温育1.5h；加入所述核酸酶P1进行酶解的条件为：37℃温育3h；加入所述碱性磷酸酶和磷酸二酯酶I进行酶解的条件为：37℃温育18h。

8.根据权利要求1所述的组织DNA中马兜铃酸I-DNA加合物的检测和相对定量方法，其特征在于，步骤C中，采用超高效液相色谱/三重四极杆质谱对所述DNA酶解产物进行检测和相对定量。