[发明专利]一种分离的核酸分子以及制备猪圆环病毒2型Cap蛋白的方法

权利要求书

1.一种编码猪圆环病毒2型Cap蛋白的分离的核酸分子，其特征在于，其碱基序列如SEQID NO.1所示。

2.含有权利要求1所述的核酸分子的载体。

3.根据权利要求2所述的载体，其特征在于，所述载体为重组表达载体或重组克隆载体。

4.根据权利要求2或3所述的载体，其特征在于，所述载体为由所述核酸分子插入pET28a载体的XhoI酶切位点得到。

5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于，所述载体还含有表达mCherry基因序列，mCherry基因序列位于所述核酸分子上游以表达出mCherry蛋白与Cap蛋白的融合蛋白。

6.含有权利要求1所述的核酸分子的重组菌。

7.根据权利要求6所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌由权利要求2-5任一项所述的载体转化大肠杆菌得到。

8.一种制备猪圆环病毒2型Cap蛋白的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

培养权利要求6或7所述的重组菌，从培养产物中分离纯化得到所述Cap蛋白。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述分离纯化包括：

收集培养后的重组菌菌体，用溶液B重悬后进行超声破碎，离心，收集上清液，将上清液转入镍离子亲和层析柱，用溶液B冲洗，再用溶液W冲洗，接着用溶液E洗脱，收集洗脱液；

其中，溶液B含有如下成分：Tris-HCl、NaCl、甘油、Triton X-100以及咪唑；

溶液W含有如下成分：Tris-HCl、NaCl、甘油、Triton X-100以及咪唑；

溶液E含有如下成分：Tris-HCl、NaCl、甘油、Triton X-100以及咪唑；

其中，溶液B中的咪唑浓度为18-22mM，溶液W中的咪唑浓度为38-42mM，溶液E中的咪唑浓度为0.8-1.2M。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述分离纯化还包括：

将所述洗脱液透析以去除咪唑后，向所述洗脱液中加入蛋白酶，再将洗脱液通过镍柱层析去掉mCherry标签蛋白，收集流穿液，得到含Cap蛋白的溶液。