[发明专利]一种分离的核酸分子以及制备猪圆环病毒2型Cap蛋白的方法

说明书

本发明公开了一种分离的核酸分子以及制备猪圆环病毒2型Cap蛋白的方法，涉及基因工程技术领域。本发明公开的编码猪圆环病毒2型Cap蛋白的分离的核酸分子其碱基序列如SEQ ID NO.1所示。该核酸分子通过密码子优化，可在大肠杆菌系统中高效表达Cap蛋白。另外，本发明公开的制备猪圆环病毒2型Cap蛋白的方法，通过使用密码子优化的Cap蛋白编码序列，可表达出可溶性的呈病毒样颗粒的Cap蛋白，实现了大量生产猪圆环病毒2型Cap蛋白的病毒样颗粒的目的，该方法具有产量高，生产成本低，同时生产周期也短等特点。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体而言，涉及一种分离的核酸分子以及制备猪圆环病毒2型Cap蛋白的方法。

背景技术

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)是仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原体，可引起猪的免疫系统抑制，产生继发感染。猪皮炎与肾炎综合征、增生性坏死性肺炎、猪呼吸道综合征、繁殖障碍、先天性颤抖等疫病都与PCV-2有关，对养猪业危害巨大。PCV2是一种正二十面体的无囊膜的单链环状DNA病毒，病毒粒子平均直径约17nm,基因组大小约为1.76kb。PCV2含有11个开放阅读框(open reading frames,ORFs),其中ORF2编码唯一的结构蛋白Cap蛋白，是PCV2主要的免疫原性蛋白，60个Cap蛋白亚基能在体外自行组装成一个正二十面体的病毒样颗粒。

病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)含有病毒的主要结构蛋白，具有与野生型病毒粒子相似的结构，但是不含有病毒的遗传物质成分，不能在体内或者体外自主复制，无感染性，但保留有野生型病毒颗粒相似的免疫原性，能有效激发机体的体液和细胞免疫。PCV2 VLPs仅由1种衣壳蛋白构成，结构简单且能在不同表达系统进行制备，如大肠杆菌表达系统、杆状病毒在昆虫细胞中表达、酵母表达系统。美国勃林格公司和法国英特威公司利用昆虫杆状病毒表达系统制备的PCV2 Cap蛋白亚单位疫苗对猪良好的免疫保护效果。但是昆虫杆状病毒表达系统生产成本高，导致其制备的亚单位疫苗价格高昂。大肠杆菌表达系统生产周期短，成本低，是适合制备PCV2 Cap蛋白亚单位疫苗的理想宿主表达系统。然而，病毒样颗粒的纯化方案通常采用密度梯度离心或者多步层析的方式，但是这些方法存在耗时长、纯化效率低等缺点。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种编码猪圆环病毒2型Cap蛋白的分离的核酸分子。

本发明的另一目的在于提供一种载体。

本发明的另一目的在于提供一种重组菌。

本发明的另一目的在于提供一种制备猪圆环病毒2型Cap蛋白的方法。

本发明是这样实现的：

一方面，本发明提供了一种编码猪圆环病毒2型Cap蛋白的分离的核酸分子，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明提供的编码猪圆环病毒2型Cap蛋白的分离的核酸分子，其通过密码子优化，其可以在大肠杆菌系统中高效表达Cap蛋白。

Cap蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

另一方面，本发明提供了含有如上所述的核酸分子的载体。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述载体为重组表达载体或重组克隆载体。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述载体为由所述核酸分子插入pET28a载体的XhoI酶切位点得到。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述载体还含有表达mCherry基因序列，mCherry基因序列位于所述核酸分子上游以表达出mCherry蛋白与Cap蛋白的融合蛋白。