[发明专利]一种建立在菌种互作基础上的山西老陈醋复合菌剂开发及多阶段强化的方法

权利要求书

1.建立在菌种互作基础上的山西老陈醋复配直投式发酵剂，其特征在于：所述菌种互作的陈醋复合菌剂的菌种为：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、蒿草假丝酵母（Candida humilis）、莫海威芽孢杆菌（Bacillus mojavensis）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、巴氏醋杆菌（Acetobacter pasteurianus）均分离自山西老陈醋发酵过程，所述菌种均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2018年5月25日和2018年12月10日，保藏编号分别为：CGMCC 15729、CGMCC 16913、CGMCC 16910、CGMCC 15731、CGMCC 15730；

在山西老陈醋优良土著酿酒酵母CGMCC 15729、蒿草假丝酵母CGMCC 16913、莫海威芽孢杆菌CGMCC 16910、植物乳杆菌CGMCC 15731进行菌种互作实验的基础上，将酿酒酵母、蒿草假丝酵母、莫海威芽孢杆菌、植物乳杆菌以1:1:1:1的比例制备成酒精阶段的复配直投式发酵剂；在山西老陈醋优良土著莫海威芽孢杆菌CGMCC 16910、植物乳杆菌CGMCC 15731、巴氏醋杆菌CGMCC 15730进行菌种互作实验的基础上，将莫海威芽孢杆菌、植物乳杆菌、巴氏醋杆菌以1:1:1的比例制备成醋酸阶段的复配直投式发酵剂；

复配直投式发酵剂的具体制备方法为：

（1）酒精发酵阶段的复配直投式发酵剂：将酿酒酵母CGMCC 15729、蒿草假丝酵母CGMCC16913按照3%的接种量分别接入到PDA液体培养基，30℃静置培养24h；将莫海威芽孢杆菌CGMCC 16910、植物乳杆菌CGMCC 15731按照3%的接种量分别接入到MRS液体培养基，莫海威芽孢杆菌在37℃下180r/min培养24h，植物乳杆菌在37℃下静置培养24h，待培养液的菌体浓度均达到10⁸cfu/mL后，采用中空纤维膜浓缩，发酵液分别浓缩至原体积的1/5后添加无菌的保护剂混合，浓缩发酵液与保护剂的体积比为1:3 v:v，以进风温度为120℃，出风温度为55℃低温喷雾干燥，至水分含量为≤5%时，将酿酒酵母CGMCC 15729、蒿草假丝酵母CGMCC16913、莫海威芽孢杆菌CGMCC 16910、植物乳杆菌CGMCC 15731干粉按质量比1:1:1:1混合即为酒精发酵阶段复配直投式发酵剂，其活菌数为10¹¹cfu/g，阴凉干燥条件下贮存期为一年；

（2）醋酸发酵阶段的复配直投式发酵剂：将莫海威芽孢杆菌CGMCC 16910、植物乳杆菌CGMCC 15731、巴氏醋杆菌CGMCC 15730按照3%的接种量分别接入到MRS液体培养基，莫海威芽孢杆菌在37℃下180r/min培养24h，植物乳杆菌在37℃下静置培养24h，巴氏醋杆菌在30℃下180r/min培养2d，待培养液的菌体浓度均达到10⁸cfu/mL后，采用中空纤维膜浓缩，发酵液分别浓缩至原体积的1/5后添加无菌的保护剂混合，浓缩发酵液与保护剂的体积比为1:3 v:v，以进风温度为120℃，出风温度为55℃低温喷雾干燥，至水分含量为≤5%时，将莫海威芽孢杆菌CGMCC 16910、植物乳杆菌CGMCC 15731、巴氏醋杆菌CGMCC 15730干粉按质量比1:1:1混合即为醋酸发酵阶段复配直投式发酵剂，其活菌数为10¹¹cfu/g，阴凉干燥条件下贮存期为一年。