[发明专利]一种从水稻种子中筛选降镉菌的筛选方法

权利要求书

1.一种从水稻种子中筛选降镉菌的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

表面消毒：筛选颗粒饱满的水稻种子，先用有效氯含量为1％的NaCLO漂洗10分钟，漂洗后收集种子，再用无菌水清洗5次，每次1分钟；

种子研磨：根据研磨罐的容量，加入适量的水稻种子，研磨1-2分钟，得到种子研磨液；

分离纯化：将所述种子研磨液涂布在培养基中，在所述培养基中培养水稻种子的内生细菌，采用30℃恒温培养箱培养，不定期观察出菌情况；挑选不同外观形态的单菌落，进行保存；

鉴定：对所有分离出来的种子内生菌进行生物学特性分析：产铁载体功能定性检测、分泌IAA功能检测、溶磷功能检测、固氮功能检测、耐Cd性检测和降镉功能检测；同时对其进行分子生物学鉴定；

筛选：通过对所有菌株的生物学特性检测的结果，选择其中综合生理功能合格的具有降镉功能的菌株作为优势菌进行保存。

2.根据权利要求1所述的一种从水稻种子中筛选降镉菌的筛选方法，其特征在于，所述步骤分离纯化中，采用R2A、1/2LB和1/2PDA三种种培养基培养内生细菌，将种子研磨液涂布在R2A、1/2LB和1/2PDA三种平板培养基上。

3.根据权利要求1所述的一种从水稻种子中筛选降镉菌的筛选方法，其特征在于，所述步骤鉴定中，所述产铁载体功能定性检测过程为：将分离纯化后的种子内生细菌接种到具有CAS检测液的检测平板上，在28℃的培养箱中培养46个小时，观察平板中菌落周围橙黄色晕圈的形成和大小。

4.根据权利要求1所述的一种从水稻种子中筛选降镉菌的筛选方法，其特征在于，所述步骤鉴定中，所述分泌IAA功能检测过程为：将分离纯化后的种子内生细菌接种于含有100mg/L的L-色氨酸的液体培养基中，在30℃和180r/min条件下进行摇床培养1天后，取50μL菌悬液滴于白色陶瓷板上，同时加入比色液，将白色陶瓷板于室温避光放置30分钟后观察，颜色变红者为阳性，表示能够分泌IAA。

5.根据权利要求1所述的一种从水稻种子中筛选降镉菌的筛选方法，其特征在于，所述步骤鉴定中，所述溶磷功能检测过程为：将斜面菌种用0.8％的生理盐水洗脱，并且于40℃活化48h后，再把溶磷细菌稀释涂布于平板上，40℃培养5d，每天定时测量溶磷圈直径与菌落直径，计算两者比值，初步定性该菌溶磷能力大小，比值越大，说明溶磷能力越强。

6.根据权利要求4所述的一种从水稻种子中筛选降镉菌的筛选方法，其特征在于，所述步骤鉴定中，所述分泌IAA功能检测过程中的比色液为体积50ml含有35％的HCLO₄的液体和体积1ml含有0.5mol/L的FeCL₃液体的混合液。

7.根据权利要求1所述的一种从水稻种子中筛选降镉菌的筛选方法，其特征在于，所述步骤鉴定中，所述降镉功能检测过程为：将降镉菌添加在水稻水培液中，在水稻生长的过程中观察并检测水稻的镉含量，检测结果无镉含量，判定为具有降镉功能的降镉菌。