[发明专利]鸡滑液囊支原体培养液效价的测定方法在审
| 申请号： | 201910140179.3 | 申请日： | 2019-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN109706229A | 公开（公告）日： | 2019-05-03 |
| 发明（设计）人： | 丁美娟;张小飞;尹秀凤;许秀梅;汪爱芬;张懿 | 申请（专利权）人： | 南京天邦生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/06 |
| 代理公司： | 常州佰业腾飞专利代理事务所(普通合伙) 32231 | 代理人： | 高姗 |
| 地址： | 211000 江苏省南京市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 培养液 支原体 滑液囊 效价 变色 检测 实时荧光定量PCR 兽用生物制品 公式计算 荧光定量 粒子数 取样 种鸡 新鲜 | ||
1.一种鸡滑液囊支原体培养液效价的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)鸡滑液囊支原体培养；
(2)荧光定量PCR方法检测步骤1所得培养液中支原体荧光定量CP值；
(3)根据支原体粒子数CP值即拷贝/μL计算鸡滑液囊支原体培养液变色单位。
2.根据权利要求1所述的鸡滑液囊支原体培养液效价的测定方法，其特征在于：所述步骤(1)具体为，将鸡滑液囊支原体接种鸡滑液囊支原体液体培养基中，37℃培养24～48h后，当培养液的颜色变黄、pH下降0.5以上时，无菌取出新鲜培养液。
3.根据权利要求1所述的鸡滑液囊支原体培养液效价的测定方法，其特征在于：所述步骤(2)具体为，
①设计MS荧光定量PCR引物：上游引物：5’-GGAATTTTCCACAATGGGCGA-3’，下游引物5’-ACGCTTGCAACCTATGTATTA-3’，如SEQ ID:1-2所示；预期扩增片段大小为191bp；
②构建荧光定量PCR阳性标准品，所用的标准品含有目的片段的重组质粒pMD18-T；
③以②阳性标准品建立MS荧光定量PCR检测的标准曲线；
④实验成立判定标准：若阳性对照的Ct值<32，阴性对照的Ct值>35，标准曲线各点相关度大于98％，则说明实验成立；
⑤取步骤(1)中培养液200ul提取MS基因组DNA，以其为模板进行PCR扩增得出支原体粒子数CP值即拷贝/μL。
4.根据权利要求1所述的鸡滑液囊支原体培养液效价的测定方法，其特征在于：所述步骤(3)中，鸡滑液囊支原体培养液变色单位(Log10)(CCU/ml)＝0.2001×Ln(CP值)+3.7777。
5.根据权利要求1所述的鸡滑液囊支原体培养液效价的测定方法，其特征在于：所述鸡滑液囊支原体培养液直接定量取样。
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