[发明专利]一种去甲金霉素菌株培育及筛选方法

说明书

本发明公开了一种去甲金霉素菌株培育及筛选方法，包括配置培养母液，菌种接种，菌种培育，荧光标记，筛选及浓缩提纯。本发明一方面操作简单，培育及筛选效率高，且成本低廉，对环境污染小，另一方面可有效的提高去甲金霉素菌株产品质量的稳定性和产量，从而极大的提高去甲金霉素菌生产效率和质量的同时，另取得良好的经济效益和社会效益。

技术领域

本发明属于化工技术领域，具体涉及一种去甲金霉素菌株培育及筛选方法。

背景技术

去甲金霉素，主要用于米诺环素和替加环素的生产。其抗菌性较强，抗菌谱与金霉素相似，其作用比四环素、土霉素强，比金霉素稳定，当前生物医药领域中重要的原料产品，但当前在进行去甲金霉素生产过程中，由于国外对我国长期的技术封锁，从而导致我国去甲金霉素产品生产工作相对滞后，缺乏高效可靠，且成本低廉的去甲金霉素产品生产工艺。

而在去甲金霉素产品生产环节中，去甲金霉素菌株培育及筛选是确保去甲金霉素产品生产效率质量的重要基础，而当前在进行对去甲金霉素菌株培育和筛选作业时，所采用的方法和工艺往往均为借鉴同类或相似菌种培育及筛选方法开展，虽然一定程度可以满足去甲金霉素菌株培育及筛选的需要，但工作效率低下，成本相对较高，易产生大量的污染性废弃物，且菌株培育质量稳定性和筛选精度均相对较差，严重影响了甲金霉素产品的产量和质量。

因此针对这一现状，需要开发一种全新的去甲金霉素菌株培育及筛选方法，以满足实际使用的需要。

发明内容

本发明公开了一种去甲金霉素菌株培育及筛选方法，以解决现有技术存在的生产效率低和产品质量差等问题。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种去甲金霉素菌株培育及筛选方法，包括如下步骤：

第一步，配置培养母液，首先根据使用需要，在培养釜中配置去甲金霉素菌株培养母液，然后在10—30分钟内，将去甲金霉素菌株培养母液匀速升温至25℃—35℃并保温，然后对去甲金霉素菌株培养母液进行30—80分钟超声波乳化作业，并在完成超声波乳化作业后对去甲金霉素菌株培养母液保温静置10—30分钟；

第二步，菌种接种，首先在无菌环境避光条件下，对培养皿和过承载架进行辐照灭活处理，然后通过菌种接种装置将去甲金霉素菌种均与涂布在若干培养皿上表面，让后将各培养皿通过承载架沿竖直方向进行交错固定，且各培养皿上表面均与水平面平行分布，即可完成菌种接种；

第三步，菌种培育，然后在无菌环境避光条件下，将第一步配置的培养母液以3—5次/10小时的频率均匀喷淋至培养皿上端面的将去甲金霉素菌种上，并在25℃—35℃恒温环境下培育2—5天，即可得到将去甲金霉素菌株；且培育过程中，培养皿上端面的培养母液液面高出培养皿上端面的将去甲金霉素菌种上端面1—10毫米，并在每次完成培养母液喷淋后，对各培养皿进行100—160r/min振荡条件下持续匀速振荡10—20分钟，且振荡时培养面上端面与水平面间夹角不大于30°；

第四步，荧光标记，完成第三步作业后，在保持第三步操作条件不变的前提下，继续持续培育1—3天，在进行该步骤培育时，选择各培养皿中的其中一个为标的培养皿，然后向喷淋到标的培养皿的培养母液中混合入生物标记物，并使生物标记物于培养母液一同喷淋到标的培养皿物中；

第五步，筛选，将经过培育后第四步中标的培养皿中的去甲金霉素菌株进行生物标记物浓度检测，并根据生物标记物浓度分布区域对标的培养皿中去甲金霉素菌株进行划分，然后根据标的培养皿中去甲金霉素菌株进行划分分布结构，依次对剩余各培养皿中菌株进行相同分布结构的划分，从而即可完成不同菌株质量划分筛选作业；