[发明专利]一种心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的制备方法

说明书

本发明属于免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的制备方法。本发明利用金银核壳纳米立方功能化的氮硫双掺杂氧化石墨烯作为催化材料，与检测抗体孵化后作为标记物，同时利用金纳米立方功能化的氧化石墨烯作为电极修饰材料，从而实现了心肌肌钙蛋白cTnI的检测，具备灵敏度高，特异性强，检测限低，对心肌肌钙蛋白的早期检测具有重要的科学意义和应用价值。

技术领域

本发明属于免疫分析和生物传感技术领，涉及一种心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的制备方法。具体是采用金银核壳纳米立方功能化的氮硫双掺杂氧化石墨烯作为催化材料标记检测抗体，同时利用金纳米立方功能化的氧化石墨烯作为电极修饰材料，从而实现了对心肌肌钙蛋白的灵敏检测。

背景技术

心肌肌钙蛋白是目前认为较好的心肌损害标志物，可用于诊断心肌梗塞，正常人血液中的心肌肌钙蛋白水平在0.5 ng/mL以下，在发生心肌梗塞后6-9小时，血液中心肌肌钙蛋白的含量出现增高并持续数天。因此，实现心肌肌钙蛋白的灵敏检测，可以使病患得到及时诊断和救治，大大加快了病患接受进一步治疗的进程，对心肌梗塞的临床诊断具有重要意义。目前，对于心肌肌钙蛋白的检测方法有很多，如酶联免疫吸附法，免疫荧光法等，但这些方法在检测过程中需要大型仪器设备，操作复杂，检测耗时长，以及存在放射性污染等问题，因此，发明一种特异性强，灵敏度高，检测速度快，操作简便的心肌肌钙蛋白免疫传感器十分重要。

电化学免疫传感器依靠抗原与其相应抗体的特异性结合，已经广泛应用于各类生物标志物的检测，一般可分为夹心型免疫传感器和无标记型免疫传感器两种。夹心型电化学免疫传感器结合了高特异性的免疫分析技术和高灵敏的电化学分析技术，具有灵敏度高、检测范围宽、检测下限低、检测快速等优点，已广泛应用于环境监测、食品安全控制、生物监测、临床检验等领域。

核壳结构的双金属纳米复合材料因其独特的光学、电学以及化学性质，目前已在生产、生活及科研中得到了广泛应用。氮硫双掺杂氧化石墨烯具有增大的表面积、良好的导电性和生物相容性，被广泛用于电池、传感器等领域。本发明采用金纳米立方功能化的氧化石墨烯作为基底材料，金银核壳纳米立方功能化的氮硫双掺杂氧化石墨烯作为催化材料，并与检测抗体进行孵化作为标记物，构建了用于测定心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器。

发明内容

本发明提供了一种心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的制备方法，实现了对心肌肌钙蛋白的的超灵敏检测。

本发明的目的之一是提供一种心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的制备方法。

本发明的目的之二是将所制备的金银核壳纳米立方功能化的氮硫双掺杂氧化石墨烯标记的夹心型免疫传感器应用于心肌肌钙蛋白的高灵敏、特异性检测。

本发明的技术方案，包括以下步骤:

1. 一种心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）制备金纳米立方功能化的氧化石墨烯分散液；

（2）制备金银核壳纳米立方功能化的氮硫双掺杂氧化石墨烯标记检测抗体分散液；

（3）制备检测心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器；

（4）制作检测心肌肌钙蛋白的夹心型电化学免疫传感器的工作曲线。

2. 制备金纳米立方功能化的氧化石墨烯分散液，步骤如下：

（1）金纳米立方分散液的制备

配制10 mL含0.25 mM氯金酸和75 mM十六烷基三甲基溴化铵的混合液于50 mL的圆底烧瓶中，在磁力搅拌下迅速加入0.5 ~ 0.7 mL、10 mM新配制的冰硼氢化钠溶液，于27℃水浴中搅拌3小时，制得金纳米粒子水溶胶；