[发明专利]一种近红外荧光蛋白smURFP及直接检测胆绿素的方法

权利要求书

1.一种用于直接检测胆绿素的近红外荧光蛋白smURFP，其特征在于,基因序列为SEQID NO：1。

2.一种直接检测胆绿素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)化学合成近红外荧光蛋白smURFP基因，并将近红外荧光蛋白smURFP在宿主细胞中进行大量表达；

2)分离纯化得到纯度>90％的近红外荧光蛋白smURFP溶液，并使用缓冲液将蛋白溶液稀释成所需浓度；

3)将50μl蛋白溶液与50μl含有胆绿素样品的溶液混匀后孵育；

4)使用酶标仪在激发光激发下检测发射光的荧光强度；

5)根据标准曲线计算所测样品的胆绿素含量。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中构建含有SEQ ID NO.1基因序列的原核表达载体，转入大肠杆菌E.coli细胞，表达近红外荧光蛋白smURFP。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中采用Ni-亲和层析、阴离子交换层析和分子筛层析分离纯化得到近红外荧光蛋白smURFP。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中缓冲液体系包括：pH为8.0、9.4、11.0的50mM Tris-HCL和PBS。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中缓冲液盐浓度包括：0mM、100mM、200mM、300mM、400mM、500mM、600mM、700mM、800mM、900mM、1000mM Nacl。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中稀释后用于检测胆绿素的检测体系中近红外荧光蛋白smURFP的最终浓度为：0.5μM-50μM。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中含有胆绿素的样品为血清时，缓冲液将血清稀释成20％。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中荧光蛋白smURFP与胆绿素溶液混合后，孵育条件为4℃，孵育时间为20min-240min。