[发明专利]一种快速检测丛植菌根真菌成功侵染寄主的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种快速检测丛植菌根真菌成功侵染寄主的方法。该方法以fadD28作为成功侵染的分子标记。本发明通过将fadD28作为分子标记，检测AMF是否成功侵染作物根系，能够大大的缩短检测时间，耗时短且检测准确、有效，操作过程简单。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种快速检测丛植菌根真菌成功侵染寄主的方法。

背景技术

丛枝菌根真菌属于球囊菌门(Glomeromycota)，能与80%的陆生植物形成丛枝菌根(Arbuscular mycorrhizal, AM)，AM的形成可以促进植物生长，增加作物产量，提高寄主对各种生物和非生物胁迫的抗性。目前，大量研究表明，AMF侵染植株根系后，通过一系列分子信号作用，诱导根系发生改变，从而与其建立共生体，为寄主植物提供养分和水分，增加植株产量，提高果实品质。丛枝菌根真菌在缓解连作障碍的作用主要体现在以下几个方面：（1）活化土壤中矿物质营养，促进植物对难溶性元素特别是磷的吸收，显著的增加植物体内的磷水平，增加宿主对氮、锌、铜、钾、钙、铁等矿质营养元素的吸收；（2）与植物根系建立的共生体能够提高寄主对水分的吸收，增强植物抗旱耐盐能力；（3）菌丝体产生糖蛋白保护根系免受土壤病原菌的侵袭，对植物的土传病害有抑制作用；（4）丛枝菌根真菌还能够改变植物根系的激素含量，从而调节地上部分器官激素水平；（5）AMF共生体能够引起植物次生代谢的改变，从而提高对人类健康的生物化学物质的合成；（6）丛枝菌根真菌菌丝能够向土壤中分泌一种球囊霉素的土壤蛋白，影响土壤团聚体的形成，改善植物生长根际的土壤环境，如改变土壤的pH值，减少土壤重金属污染；（7）丛枝菌根真菌还能够与根际的其他微生物发生相互作用，如根瘤菌、溶磷细菌、苏云金杆菌等发生相互作用，改善植物根际的微生物环境。

AMF在土壤改良和植物生长发育方面发挥着重要的作用。然而，检测AMF侵染植物成功与否需要对所取的根进行固定液固定、氢氧化钾进行透明、染色和制片，最后进行镜检，这个过程至少需要2天。要完成整个过程不仅消耗时间，而且需要配制大量试剂。随着分子生物学的发展，检测AMF侵染根系已开发出一些特异分子标记，如REDUCED ARBUSCULARMYCORRHIZAL 1(RAM1)和glycerol-3-phosphateacyl transferease(RAM2)等。但是，这些标记数量远远不够，因此，研究一种能够快速检测丛植菌根真菌侵染成功与否的方法成为了亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术中存在的检测时间过程繁琐、消耗时间长等问题，本发明提供了一种快速检测丛植菌根真菌侵染寄主的方法。

本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：

本发明提供了一种快速检测丛植菌根真菌侵染寄主的方法，该方法以fadD28作为成功侵染的分子标记。

本发明提供的方法具体包括以下步骤：

（1）丛枝菌根真菌利用高粱进行繁殖，待高粱生长至4个月时取根系土充分混匀后备用；

（2）取种植过作物的土壤进行高温高压灭菌2次，中间间隔24h，然后室温放置一周，得已灭菌的土壤备用，将作物种子用70%的酒精进行表面消毒2分钟，用无菌水冲洗数次，放在25℃的保温箱内进行发芽，待种子萌发后放入已灭菌的土壤中，种子周围撒入含有Glomus mosseae孢子的菌土10g，另外，对照处理为等量的高温高压灭菌的菌土；

（3）出苗后30天，取植株根系进行RNA提取， 去除基因组DNA： 设计荧光定量引物进行荧光定量PCR；