[发明专利]一株生产D-对羟基苯甘氨酸的枯草芽孢杆菌在审
| 申请号： | 201910150242.1 | 申请日： | 2019-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN111621452A | 公开（公告）日： | 2020-09-04 |
| 发明（设计）人： | 刘洋;张臻峰;孔繁智;于波 | 申请（专利权）人： | 中国科学院微生物研究所;中国科学院大学;北京优酶科技发展有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/75;C12P13/04;C12R1/125 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 白艳 |
| 地址： | 100101 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 生产 羟基 甘氨酸 枯草 芽孢 杆菌 | ||
1.重组菌，为共表达海因酶编码基因和N-氨甲酰水解酶编码基因的枯草芽孢杆菌。
2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于：
所述海因酶编码基因源于Bacillus stearothermophilus SD-1；
所述N-氨甲酰水解酶编码基因源于Agrobacterium tumefaciens NRRL B11291；
和/或，所述海因酶的氨基酸序列为序列2；
所述N-氨甲酰水解酶的氨基酸序列为序列4；
和/或，所述海因酶编码基因的核苷酸序列为序列1；
所述N-氨甲酰水解酶编码基因的核苷酸序列为序列3。
3.根据权利要求1或2所述的重组菌，其特征在于：所述重组菌中，所述海因酶编码基因紧邻启动海因酶编码基因和N-氨甲酰水解酶编码基因共表达的启动子。
4.根据权利要求3所述的重组菌，其特征在于：
所述重组菌中，启动所述海因酶编码基因和N-氨甲酰水解酶编码基因表达的启动子为Pcry3A。
5.一种制备权利要求1-4任一所述重组菌的方法，包括如下步骤：将含有海因酶编码基因和N-氨甲酰水解酶编码基因的融合基因片段及其启动子导入枯草芽孢杆菌中，得到重组菌。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：
所述将含有海因酶编码基因和N-氨甲酰水解酶编码基因的融合基因片段及其启动子导入枯草芽孢杆菌中为将所述融合基因片段及其启动子通过重组载体导入所述枯草芽孢杆菌；
所述重组载体为将所述融合基因片段插入表达载体得到的载体，且所述融合基因片段与所述表达载体中的所述启动子共表达。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：
所述重组载体中，所述海因酶编码基因紧邻所述启动子；
和/或，所述启动子为Pcry3A；
和/或，所述海因酶编码基因源于Bacillus stearothermophilus SD-1含突变M63I/F159S；
所述N-氨甲酰水解酶编码基因源于Agrobacterium tumefaciens NRRL B11291；
和/或，所述海因酶的氨基酸序列为序列2；
所述N-氨甲酰水解酶的氨基酸序列为序列4；
和/或，所述海因酶编码基因的核苷酸序列为序列1；
所述N-氨甲酰水解酶编码基因的核苷酸序列为序列3。
8.权利要求1-4任一所述重组菌或由权利要求5-7任一所述方法制备的重组菌在生产D-对羟基苯甘氨酸中的应用。
9.一种生产D-对羟基苯甘氨酸的方法，包括如下步骤：用权利要求1-4任一所述重组菌催化底物D-对羟基苯海因，得到D-对羟基苯甘氨酸。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：
所述催化反应体系中含有甲苯；
和/或，所述甲苯在所述催化反应体系中的体积百分含量为0.05％-2.0％。
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