[发明专利]一种检测结核分枝杆菌TB的引物、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测结核分枝杆菌TB的引物，其特征在于，该引物由正向引物和反向引物组成，所述正向引物标记有生物素，所述反向引物标记有FITC或Dig，

所述正向引物为核苷酸序列SEQ ID NO：1：

5’Biotin-GCG TAG GCG TCG GTG ACA AAG GCC ACG TAG3’；

所述反向引物为核苷酸序列SEQ ID NO：2：

5’FITC/DIG-TCC CGC CGA TCT CGT CCA GCG CCG CTT CGG3’。

2.一种检测结核分枝杆菌TB的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括权利要求1所述的引物。

3.根据权利要求2所述的一种检测结核分枝杆菌TB的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括重组酶、聚合酶、DNA结合蛋白、缓冲溶液、阳性内质控、ddH₂O和固相显色检测试剂。

4.根据权利要求3所述的一种检测结核分枝杆菌TB的试剂盒，其特征在于，所述重组酶为T4 uvsX/uvsY；

所述聚合酶为Bsu DNA聚合酶；

所述DNA结合蛋白为T4 gp32；

所述缓冲溶液包括Tris-HCl缓冲液、乙酸钾、乙酸镁、二硫苏糖醇、dNTPs、ATP、磷酸肌酸、肌酸激酶和Carbowax20M。

5.根据权利要求4所述的一种检测结核分枝杆菌TB的试剂盒，其特征在于，所述Tris-HCl缓冲液浓度为50mM，所述Tris-HCl缓冲液的pH值为7.9，所述乙酸钾浓度为100mM，所述乙酸镁浓度为14mM，所述二硫苏糖醇浓度为2mM，所述dNTPs浓度为200μM，所述ATP浓度为3mM，所述磷酸肌酸浓度为50mM，所述肌酸激酶浓度为100ng/μL，所述Carbowax20M浓度为5wt％。

6.根据权利要求3所述的一种检测结核分枝杆菌TB的试剂盒，其特征在于，所述阳性内质控包括由如SEQ ID NO：3和SED ID NO：4所示的核苷酸序列组成的引物对。

7.根据权利要求3所述的一种检测结核分枝杆菌TB的试剂盒，其特征在于，所述固相显色检测试剂包括固相显色试纸条和显色检测缓冲液。

8.根据权利要求7所述的一种检测结核分枝杆菌TB的试剂盒，其特征在于，所述显色检测缓冲液由浓度为5wt％的BSA和浓度为10mM的PBS缓冲液组成。

9.根据权利要求3所述的一种检测结核分枝杆菌TB的试剂盒，其特征在于，所述的阳性内质控为插入了人GAPDH基因的重组质粒。

10.一种利用权利要求2～9任一项所述的试剂盒检测结核分枝杆菌TB的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待测样本的DNA作为检测模板；

(2)对所述检测模板进行扩增，得到扩增DNA序列；

(3)采用固相显色试纸条对扩增产物进行检测；

(4)根据试纸条反应区呈现点判断检测结果。