[发明专利]一种肺炎衣原体快速检测引物组、试剂盒

说明书

本发明涉及一种肺炎衣原体快速检测引物组、试剂盒，所述肺炎衣原体快速检测引物组包括检测肺炎衣原体基因组MOMP基因序列的上、下游引物和探针；所述肺炎衣原体快速检测试剂盒包括以下内容：裂解液、复溶液、含引物探针的EMA反应管、阳性质控品、阴性质控品。本发明提供的引物组能与肺炎衣原体MOMP基因特异性结合，配合EMA技术制备成肺炎衣原体检测试剂盒，显著提高了检测的特异性和灵敏度。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种肺炎衣原体快速检测引物组、试剂盒。

背景技术

肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae，CP)是20世纪80年代发现的一种衣原体种，革兰染色阴性，专性细胞内寄生的原核生物，是一种人类病原体。主要通过呼吸道飞沫传播。潜伏期为15-23天。进入人体后，产生内毒素，可引起上呼吸道感染，如鼻窦炎、中耳炎和咽炎，也可引起下呼吸道感染，如支气管炎和肺炎。近年来的调查显示，社区获得性肺炎(community acquired pneumonia，CAP)病原体中，肺炎衣原体已是继肺炎链球菌和流感嗜血杆菌之后引起CAP的主要病原体，且所占比重不断升高。在人口较为密集的地方很容易出现流行。大部分人群呈隐性感染，初期临床特征往往不明显，一旦不能及时发现容易造成治疗延误。疑似感染后根据其临床表现、X线检查等也很难得出准确的诊断结论。对于衣原体肺炎的治疗，较为有效药物主要包括大环内酯类、四环素类和氟喹诺酮类，但是四环素类和氟喹诺酮类不推荐在儿童中使用。此外，衣原体肺炎治疗反应比较慢，疗程较长，如治疗过早停止，症状容易复发。有研究表明，年老体弱、免疫力低下者较易感染肺炎衣原体，且易反复，不易控制，感染者中，老年人病死率达5％-10％，而我国老龄化的日益严重，这使得肺炎衣原体感染的早期诊断及控制更加重要。

目前，临床上检测肺炎衣原体的方法很多，主要有细胞培养分离法、血清学方法、核酸扩增法等。细胞培养分离法需要很长时间，灵敏度较低且操作繁复；血清学方法一般检测IgM或IgG抗体，而体内抗体的产生需要较长时间且容易受到干扰，不能做到早期筛查。核酸扩增法因其高灵敏度、耗时短等特点，逐渐成为主要的检测方法。目前常用于检测肺炎衣原体的分子检测技术包括实时荧光定量PCR、环介导核酸等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplification method，LAMP)等。而这些方法虽然灵敏度高，但需要变温循环或者65℃较高的恒温，容易产生气溶胶，具有污染的风险，这就使得特异度受到影响，此外这些方法要求配备昂贵精密的实时荧光PCR扩增仪，且操作繁杂，耗时较长，对操作人员有较高技术要求。如专利CN 105567802 A采用的是Taqman探针，利用PCR的方法整个反应需要2小时。

为了克服以上困难，本发明针对肺炎衣原体外膜主要蛋白编码基因(MOMP)设计了多对引物进行筛选，最终得到的引物，可以特异结合MOMP基因，且由于引物较长，对碱基突变有一定的包容性，提高了检测的灵敏度；探针长度35bp，区别于Taqman的两端标记，本发明中的探针标记处于序列中下游第26-28位，嵌于序列内部，这样的设计有助于荧光降噪，降低检测的假阳性、提高检测的特异度。配合常温核酸扩增技术(Enzymes MediatedAmplification，EMA)，在37-45℃相对较低的恒温条件下，检测10-30分钟，可使本试剂盒有灵敏度高、特异度高、耗时短、操作简单、成本低、防污染等优点，使肺炎衣原体的快速检测试剂盒在分子诊断行业具有一定的竞争力。

发明内容

针对以上问题，本发明提供一种肺炎衣原体快速检测引物组、试剂盒，灵敏度高、特异度高、操作简单、仪器成本低、不易污染，能够快速而准确地检测肺炎衣原体。