[发明专利]一种提高赖氨酸脱羧酶活性和稳定性的分子改造方法在审
| 申请号： | 201910158461.4 | 申请日： | 2019-03-04 |
| 公开（公告）号： | CN110004131A | 公开（公告）日： | 2019-07-12 |
| 发明（设计）人： | 张雷;齐海山;杜岩 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N9/96;C07K19/00;C12N15/70;C12N15/62 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 李素兰 |
| 地址： | 300350 天津市津南区海*** | 国省代码： | 天津;12 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 赖氨酸脱羧酶 催化活性 分子改造 基因片段 改造 宿主 表达载体 不确定性 多肽基因 多肽片段 基因连接 随机突变 一端连接 有机溶剂 酶分子 多肽 制备 蛋白 筛选 转入 基因 | ||
1.一种提高赖氨酸脱羧酶活性和稳定性的分子改造方法；其特征是在赖氨酸脱羧酶分子LDC的一端连接一段多肽片段EK。
2.如权利要求1所述的方法，其特征是包括如下步骤：
(1)获得赖氨酸脱羧酶分子的基因片段；
(2)将编码EK多肽的基因片段连接到赖氨酸脱羧酶基因的一端；
(3)将连接有EK多肽基因的赖氨酸脱羧酶基因连接到表达载体上，转入到宿主中，表达改造后的赖氨酸脱羧酶LDC-EK。
3.如权利要求1所述的方法，其特征是所述的多肽片段由赖氨酸和谷氨酸交替排列而成。
4.如权利要求1所述的方法，其特征是所述的多肽片段长度为20-200个氨基酸。
5.如权利要求2所述的方法，其特征是步骤(2)中将编码多肽的基因片段连接到赖氨酸脱羧酶基因的5’端。
6.如权利要求2所述的方法，其特征是步骤(2)中将编码多肽的基因片段连接到赖氨酸脱羧酶基因的3’端。
7.如权利要求2所述的方法，其特征是步骤(2)中将编码多肽的基因片段同时连接到赖氨酸脱羧酶基因的5’端和3’端。
8.如权利要求2所述的方法，其特征是步骤(1)获得编码赖氨酸脱羧酶分子的基因序列SEQ ID NO.1。
9.如权利要求2所述的方法，其特征是步骤(2)方法是:将编码EK多肽的基因片段为SEQID NO.2、长度为60bp连接到编码赖氨酸脱羧酶分子基因片段SEQ ID NO.1的5’端，3’端，以及同时连接到5’和3‘端，分别得到序列为SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.5的基因序列；其中，EK多肽的基因序列不仅仅限于SEQ ID NO.2，其长度范围是以SEQ ID NO.2为基本单元，1-10个重复(60bp-600bp)，对应的EK多肽长度即为20-200个氨基酸。
10.如权利要求2所述的方法，其特征是步骤(3)的方法是：将步骤2所得到的基因片段SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5连接到适用于大肠杆菌E.coli BL21表达系统的表达型载体上，转入宿主E.coli BL21中进行表达，得到在C端和或N端连接有EK多肽段的赖氨酸脱羧酶分子LDC-EK。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于天津大学，未经天津大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910158461.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
