[发明专利]一种高特异性核酸检测试剂及其使用方法

权利要求书

1.一种高特异性核酸检测试剂，其特征在于，所述的检测试剂的主要成分包括检测目标核酸链的特异性探针和可以降解核酸单链的单链核酸酶。

2.一种高特异性核酸检测试剂的使用方法，其特征在于，具体包括下列步骤：

步骤一：将特异性探针①与含有待检测的核酸链②加入到反应缓冲液中，进行变性退火；

步骤二：将单链核酸酶加入到反应缓冲液中，在优化温度下孵育特定时间，其优化温度取决于特异性探针的探针长度、构成特异性探针的核苷酸组分与类型、以及单链核酸酶的最适工作温度；其反应时间取决于单链核酸酶的酶切效率；

步骤三：反应结束后，将反应体系在95℃孵育20分钟；

步骤四：将反应体系自然降温到室温；

步骤五：将单链核酸酶处理过的反应体系进行核酸检测。

3.如权利要求1所述的高特异性核酸检测试剂，其特征在于，所述的检测目标核酸链的特异性探针是长度不少于十个、不多于三十个核苷酸的核酸单链；特异性探针可以与待检测的核酸链上的片段形成杂交核酸双链；构成特异性探针的核苷酸可以是核苷酸、脱氧核苷酸以及核苷酸衍生物，包括但不限于锁核酸、肽核酸、硫核酸、双脱氧核苷酸、甲氧基核苷酸。

4.如权利要求1所述的高特异性核酸检测试剂，其特征在于，可以降解核酸单链的单链核酸酶具有降解杂交核酸双链中的非双链结构的核酸酶。

5.如权利要求1所述的高特异性核酸检测试剂，其特征在于， 所述的非双链结构的核酸酶的非双链结构包括不符合标准碱基配对（A:T、A:U和 G:C）原则的碱基对，或由于核苷酸插入或缺失形成的泡状结构或环状结构，或核酸双链的单链切口、或核酸双链的单链缺口。

6.如权利要求1所述的高特异性核酸检测试剂，其特征在于，所述的可以降解核酸单链的单链核酸酶包括但不限于S1核酸酶（S1 Nuclease）、绿豆芽核酸酶（Mung BeanNuclease）、P1核酸酶（P1 Nuclease）、BAL 31核酸酶（BAL 31 Nuclease）、核糖核酸酶A（Ribonuclease A）、芹菜核酸酶（CEL I Nuclease）。

7.如权利要求1所述的所述的高特异性核酸检测试剂，其特征在于，所述的待检测的核酸链，可以是核酸双链或核酸单链，可以是长核酸链或寡核酸片段，可以是线性核酸链或环形核酸链；所述的待检测的核酸链可以是DNA链、RNA链或含有核苷酸衍生物的核酸链。

8.如权利要求2所述的高特异性核酸检测试剂的使用方法，其特征在于，将单链核酸酶处理过的反应体系进行核酸检测包括任何一种依赖于核酸扩增方法的检测技术或不依赖于核酸扩增方法的检测技术。

9.如权利要求2所述的高特异性核酸检测试剂的使用方法，其特征在于，所述的依赖于核酸扩增方法的检测技术是基于热循环核酸扩增技术或基于恒温核酸扩增技术。