[发明专利]一种高特异性核酸检测试剂及其使用方法

说明书

本发明涉及基础研究（基因表达调控、生物进化、种属鉴定、基因分型）和应用研究（药物开发、法医鉴定、食药品安全监管、海关检验检疫等）领域中的高特异性核酸检测，具体涉及到一种高特异性核酸检测试剂及其使用方法。该检测试剂的主要成分包括检测目标核酸链的特异性探针和可以降解核酸单链的单链核酸酶。本发明的高特异性核酸检测试剂操作简便、快速便捷、性价比高，可以满足自动化的需要，省时省力，便于实现规模化实验和基础研究。

技术领域

本发明涉及基础研究（基因表达调控、生物进化、种属鉴定、基因分型）和应用研究（药物开发、法医鉴定、食药品安全监管、海关检验检疫等）领域中的高特异性核酸检测，具体涉及到一种高特异性核酸检测试剂及其使用方法。

背景技术

现代生物学（植物学、动物学、微生物学、海洋生物学、古生物学、古人类学等）的重要研究内容之一是核酸鉴定和核酸检测。完整的基因组信息可以使人类在基因水平上对地球上已经灭绝的和现存的各种各样物种的起源、进化、迁徙以及灭亡进行深层次、多视角、全方位的分析和解读，因为基因组的核苷酸序列以及核苷酸变异决定了物种特征和物种进化。

核酸检测的基本原理是利用碱基互补配对原则。基于基因组信息设计的核酸探针与待检测的目标核酸片段形成稳定的杂交双链，然后利用体外扩增技术将与核酸探针结合的微量目标核酸片段扩增到易于检测的水平。核酸检测的成功取决于杂交双链的稳定性，而杂交双链的稳定性受到核酸链的长度、核酸链的核苷酸组分以及序列、溶液中的离子强度、杂交温度以及杂交双链的碱基互补度等因素的影响。在其他条件固定的条件下，杂交双链的碱基互补度越高，其杂交双链的稳定性也越高，即检测特异性越高。但是，当目标核酸片段的核苷酸序列和非目标核酸片段的核苷酸序列之间仅仅相差一个或几个核苷酸时，核酸探针就难于区分目标核酸链和非目标核酸片段，由此产生了假阳性检测信号。这样的假阳性结果给检测具有细微的核苷酸变异提出了巨大的挑战。

细微的核苷酸变化包括基因的单点突变、单核苷酸多态性（single nucleotidepolymorphism，简称SNP）、甲基化、微RNA（microRNA）家族成员等。这些细微的核苷酸变异不仅可以影响基因水平的变化，而且还可以在表观遗传水平上影响物种特性。

目前常用的检测这些细微的单核苷酸变化的方法有核酸测序（sequencing）、高分辨溶解曲线（high resolution melting，简称HRM）、限制性酶切片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism，简称RFLP）、单链构象多态性（singlestrand conformation polymorphism，简称SSCP）、等位基因特异的寡聚核苷酸杂交（allele specific oligonucleotide hybridization，简称ASO）、等位基因特异性PCR（allele specific PCR）等。虽然这些技术在某种程度上可以对SNP、单点突变等进行检测，但是它们存在一定的技术缺陷。例如，核酸测序被认为是核酸检测的金标准，但是核酸测序的技术含量高，需要专业技术人员操作，测序费用高，不易于普及。SSCP和RFLP必须通过凝胶电泳进行检测，难于满足自动化的需要，耗时费力，不便于实现规模化实验。等位基因特异PCR则面临着引物设计合理性的限制。近年来，人们还利用核酸与蛋白质相互作用发明了SNP和单点突变的检测技术，如基于单链核酸酶的检测方法。但是，这些方法都需要首先对待测核酸进行PCR扩增，然后再利用核酸酶将PCR扩增产物水解成为不同的片段，从而影响了核酸检测的高特异性。因此，无论是基础研究还是实际应用，人们迫切需要高特异性的核酸检测方法和技术。

发明内容

鉴于现有技术存在的缺陷，本发明提供了一种高特异性核酸检测试剂及其使用方法。

为了实现本发明的目的，提供以下技术方案。

一种高特异性核酸检测试剂，该检测试剂的主要成分包括检测目标核酸链的特异性探针和可以降解核酸单链的单链核酸酶。