[发明专利]一种基因修饰的树突状细胞疫苗的制备及应用

说明书

本发明提供一种基因修饰的树突状细胞疫苗的制备及应用。具体的，本发明提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白具有式I所示的结构：Z1‑L1‑Z2‑L2‑Z3 (I)其中，Z1为无或信号肽元件；L1为无或连接肽；Z2为TRAG‑3蛋白；L2为无或连接肽；Z3为LAMP‑1蛋白的跨膜区和胞内区。本发明的融合蛋白可将TRAG‑3抗原表位负载到树突状细胞中，促使树突状细胞能更好的将TRAG‑3抗原提呈，激发更强的抗原特异性的T细胞免疫反应，从而使得树突状细胞具有更好的肿瘤，尤其是TRAG‑3阳性肿瘤的杀伤活性。

技术领域

本发明涉及生物学和医学领域，更具体地，本发明涉及一种基因修饰的树突状细胞疫苗的制备及应用。

背景技术

肿瘤是继心脑血管疾病成为人类健康的第二大杀手，传统的肿瘤治疗方法主要是手术治疗、放疗及化疗等。传统的治疗手段不能很好的解决肿瘤迁移及再次复发的难题，目前新型肿瘤治疗方法—免疫疗法是肿瘤治疗及预防最具潜力的一种方法。肿瘤免疫疗法包括很多种例如Car-T、TCR-T及树突状细胞疫苗等，在临床上取得了良好的疗效。其中Car-T等免疫疗法在实体瘤中治疗效果并不理想，还存在很强的毒副作用。基于树突状细胞疫苗进行的肿瘤免疫治疗临床上也取得了良好的疗效，例如：黑色素瘤、前列腺癌等。DC疫苗具有毒副作用小，安全性高，针对肿瘤靶向性良好的一种免疫疗法。树突状细胞(DC：dendritic cell)是一类专职性抗原提呈细胞，具有起始并调控固有免疫及适应性免疫反应的能力，能高效摄取、加工处理和提呈抗原。树突状细胞未受到抗原刺激时处于未成熟状态，接受抗原刺激后树突状细胞能够快速成熟活化并(将抗原提呈至T细胞)，经淋巴系统迁移至次级淋巴器官，将抗原提呈至T细胞，促使T细胞活化引起机体T细胞免疫应答。根据树突状细胞表面分子不同，人体内主要存在三类树突状细胞：CD303(pDC浆细胞样树突状细胞)、CD1c及CD141树突状细胞。其中CD1c和CD141树突状细胞能够分泌IL-12，促进Th1细胞的生成并刺激初始CD8⁺T细胞的活化。

虽然，树突状细胞疫苗在肿瘤免疫治疗中取得一些进展，但树突状细胞疫苗治疗肿瘤仍具有很大的局限性。一方面是因为部分肿瘤抗原免疫原性较低，无法很好的激活机体内肿瘤特异性免疫反应。另一方面，由于机体内肿瘤微环境所产生的免疫抑制功能阻碍树突状细胞疫苗在机体内发挥正常功能。肿瘤抗原主要包括：肿瘤相关抗原、病毒相关抗原、癌睾抗原及新抗原等。其中癌睾抗原(Cancer-testis Antigen,CT)是表达在多种肿瘤组织中、睾丸、胎盘及卵巢中的一类蛋白分子，不表达在其他任何组织中的一类抗原。癌睾抗原也是目前相对于肿瘤相关抗原免疫原性较高的一类抗原，能够有希望作为靶点治疗肿瘤疾病。至今已经筛选出250多个CT抗原成员，其中临床应用较多的主要有：MAGE和NY-ESO-1等。TRAG-3也是癌睾抗原中的一种，最初是在卵巢癌细胞中发现，该蛋白可以抵抗紫杉醇对细胞的胁迫作用。研究发现TRAG-3高表达在多种实体瘤中，包括78％黑色素瘤、54％非小型细胞肺癌及60％乳腺癌中等。因此，该蛋白作为肿瘤细胞治疗的靶点具有重大的潜在研究价值。

目前，临床上制备树突状细胞疫苗主要是将人外周血单核细胞分离，体外利用GM-CSF及IL-4诱导单核细胞分化成树突状细胞。随后采用小分子抗原肽、腺病毒包装载体、慢病毒包装载体及肿瘤溶解物等致敏DC，制备成树突状细胞疫苗。由于不同的抗原其免疫原性强弱不同，临床上还可以通过加入不同的免疫佐剂来提高其活化程度。

因此，本领域迫切需要开发有效的TRAG-3阳性肿瘤的预防性和/或治疗性疫苗。

发明内容

本发明的一个目的就是提供一种有效的TRAG-3阳性肿瘤的预防性和/或治疗性疫苗。

本发明的另一目的在于提供一种靶向TRAG-3抗原修饰的树突状细胞疫苗，主要针对TRAG-3抗原阳性肿瘤的治疗。利用慢病毒感染树突状细胞的方法将TRAG-3抗原表位负载到树突状细胞中。

本发明的另一目的在于，促使树突状细胞能更好的将TRAG-3抗原提呈。