[发明专利]一种评估细胞因子对EBV-LMP2特异性CTL免疫增强效果的实时监测体系

权利要求书

1.一种评估细胞因子对EBV-LMP2特异性CTL免疫增强效果的实时监测体系，包括：

(1)诱生EBV-LMP2特异性CD8+T细胞；

(2)用所述EBV-LMP2特异性CD8+T细胞在iCELLIgence系统中与靶细胞共培养；

(3)用RTCA监测EBV-LMP2特异性CD8+T细胞对靶细胞的杀伤效率；

(4)用RTCA监测细胞因子的浓度对所述杀伤效率的影响。

2.根据权利要求1所述的体外培养方法，其中，步骤(1)中，所述诱生指：用rAd-LMP2疫苗免疫C57BL/6小鼠获得的SFC/106脾脏淋巴细胞。

3.根据权利要求2所述的体外培养方法，其中，所述小鼠指C57BL/6小鼠；优选地，所述免疫指：将rAd-LMP2疫苗肌肉注射至C57BL/6小鼠体内。

4.根据权利要求1所述的体外培养方法，其中，步骤(2)中，所述靶细胞指C3-LMP2-GFP靶细胞；优选地，所述C3-LMP2-GFP靶细胞的最适接种密度测量为每孔2.5×103,或5×103,或1×104,或2×104个细胞；最适接种密度优选为5×103/孔。

5.根据权利要求1所述的体外培养方法，其中，步骤(3)中，EBV-LMP2特异性CD8+T细胞对靶细胞的效靶比选自10:1、25:1、50:1、或100:1。

6.根据权利要求1所述的体外培养方法，其中，步骤(4)中，所述细胞因子选自由IL-2、IL-7、IL-15、IL-21组成的组；优选地，所述细胞因子选自下述组合：IL-2+IL-7、或，IL-2+IL-7+IL-21、或，IL-7+IL-21、或，IL-2+IL-21；更优选地，所述IL-2的浓度选自：0、10、20、40、60、或120U/mL；所述IL-21的浓度选自0、10、20、30、40、50、或100ng/mL，优选10ng/mL；所述IL-7的浓度为10ng/mL。

7.一种EBV-LMP2特异性CD8+T细胞体外培养体系，包括：效靶比选自10:1、25:1、50:1、或100:1的LMP2特异性CD8+CTL与靶细胞共培养体系。

8.根据权利要求7所述的EBV-LMP2特异性CD8+T细胞体外培养体系，所述LMP2特异性CD8+CTL与靶细胞共培养体系中，靶细胞在培养板上的接种密度为每孔2.5×10³,或5×10³,或1×10⁴,或2×10⁴个细胞；优选为5×10³/孔；所述靶细胞优选为C3-LMP2-GFP靶细胞。

9.一种EBV-LMP2特异性CD8+T细胞体外杀伤体系，包括：添加了浓度为0-120U/mL的IL-2，和/或，浓度为0-100ng/mL IL-21，和/或，浓度为10ng/mL的IL-7的权利要求7或8所述的EBV-LMP2特异性CD8+T细胞体外培养体系。

10.根据权利要求9所述的EBV-LMP2特异性CD8+T细胞体外杀伤体系，所述IL-2浓度选自0、10、20、40、60、或120U/mL；所述IL-21浓度选自0、10、20、30、40、50、或100ng/mL；

优选地，所述EBV-LMP2特异性CD8+T细胞体外杀伤体系为添加了终浓度为10ng/mL的IL-21的所述的EBV-LMP2特异性CD8+T细胞体外培养体系。