[发明专利]一种利用FLD1启动子调控黏玉米谷氨酰胺转氨酶表达的重组毕赤酵母菌株及构建方法有效
| 申请号： | 201910162523.9 | 申请日： | 2019-03-05 |
| 公开（公告）号： | CN109929769B | 公开（公告）日： | 2021-07-23 |
| 发明（设计）人： | 李洪波;李春爽;郑姗;韩翼宇 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12N15/66;C12N9/10;C12R1/84 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人： | 韩晓梅 |
| 地址： | 300457 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 fld1 启动子 调控 玉米 谷氨酰胺 转氨酶 表达 重组 酵母 菌株 构建 方法 | ||
1.一种利用FLD1启动子调控黏玉米谷氨酰胺转氨酶表达的重组毕赤酵母菌株，其特征在于：所述重组毕赤酵母菌株为将来源于黏玉米
所述PFLD1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述重组毕赤酵母的宿主为
所述谷氨酰胺转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.如权利要求1所述的重组毕赤酵母菌株生产黏玉米来源谷氨酰胺转氨酶的方法，其特征在于：步骤如下：
将重组毕赤酵母菌株接种于YPD培养基中，25-30℃，210-260r/min活化培养20-27h后，得活化的培养液，再将活化的培养液转接至发酵体系中发酵生产谷氨酰胺转氨酶。
3.根据权利要求2所述的重组毕赤酵母菌株生产黏玉米来源谷氨酰胺转氨酶的方法，其特征在于：按10％的接种量将活化的培养液转接到发酵培养基中，每24h加入甲胺，使其质量终浓度为0.5％，发酵时间为96h，即得谷氨酰胺转氨酶。
4.如权利要求1至3任一项所述的重组毕赤酵母菌株的构建方法，其特征在于：步骤如下：
⑴获得来源于黏玉米的谷氨酰胺转氨酶基因与启动子PFLD1序列；
⑵将pPIC9K载体与谷氨酰胺转氨酶基因连接，获得含有黏玉米谷氨酰胺转氨酶基因的重组质粒pAOX9k-tgz；
⑶启动子PFLD1序列进行Sac I和Bam HI双酶切并定向插入同样经Sac I和Bam HI双酶切的重组质粒pAOX9k-tgz中，获得重组载体pFLD9k-tgz；
⑷将步骤⑶得到的重组载体pFLD9k-tgz转化到宿主中，获得重组毕赤酵母菌株。
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