[发明专利]一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫化学染色试剂盒

说明书

本发明涉及液基细胞学免疫细胞化学领域，具体涉及到一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫组织化学试剂盒。本发明中提供了一种即用型抗体工作液，包括抗体试剂、牛血清白蛋白、非还原性糖、甜菜碱、环糊精、中性无机盐、表面活性剂、防腐剂；其中所述抗体试剂为试剂A或试剂B；所述试剂A为p16^INK4a单克隆抗体和Ki‑67单克隆抗体的PBS缓冲溶液；所述试剂B为辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗和碱性磷酸酶标记的羊抗兔二抗的PBS缓冲溶液；所述PBS缓冲溶液的pH值为7.2～7.8。

技术领域

本发明涉及液基细胞学免疫细胞化学领域，具体涉及到一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫化学染色试剂盒。

背景技术

宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，其发病率仅次于乳腺癌并呈年轻化趋势，严重危害妇女身体健康。然而，宫颈癌又是唯一明确病因，有望成为第一个被人类攻克的肿瘤。因此，预防及早期筛查对降低宫颈癌的发病及死亡率具有重要意义。

目前，宫颈癌诊断的主要方法有：宫颈脱落细胞学检查、人乳头瘤病毒(HPV)检测、阴道镜检查、病理活检等；中华医学会推荐的宫颈癌诊断三阶段程序为细胞学、阴道镜、宫颈组织活检。该诊断程序虽然有效，但也存在明显的局限性。阴道镜、组织活检是一种创伤性检查，给受检者带来一定痛苦，不适用于对所有病例进行筛查，应用范围比较小。而细胞学检测主要是通过病理医生对宫颈脱落细胞进行病理染色后再于显微镜下进行观察诊断。该方法操作较为简便，患者无痛苦，适合进行常规筛查。但受限于病理医生的经验，存在一定的假阳性和假阴性，造成部分高危患者的漏诊。因此，急需更加客观的肿瘤标志物的辅助诊断方法，提高细胞学筛查的敏感度和特异度。

大量研究证实，大于90％的宫颈癌的发生与HPV的感染相关，HPV的E6、E7蛋白分别与P53的抑癌基因产物和pRb蛋白结合，影响与细胞周期和增殖相关的基因p16^INK4a和Ki-67等的表达。P16^INK4a基因是一种直接作用于细胞周期、抑制细胞分裂的抑癌基因，其过度表达与HPV感染密切相关，并已成为HPV感染转化的一个替代标志物。Ki-67是一种细胞增殖相关蛋白，只能在增殖细胞的细胞核中检出。因此，同一个正常宫颈上皮组织细胞中不会同时表达该两种蛋白。如果在宫颈上皮细胞中同时检测到p16^INK4a和Ki-67的表达，则认为该细胞的周期调控出现失常，并以此作为宫颈上皮细胞转化状态的一个指标。另外，p16^INK4a主要表达细胞核和细胞质，而Ki-67只在细胞核中表达，因此可以实现通过免疫组化实验检测宫颈癌组织细胞中两蛋白的共表达情况。大量研究表明p16^INK4a和Ki-67免疫组化双染检出CIN2及以上宫颈癌病变的灵敏度较高，其特异性明显高于细胞学检查和高危HPV检测，能够降低误诊率，提高诊断阳性预测值。

本发明要解决的技术问题是：当患者的高危HPV感染结果为阳性以及细胞学筛查诊断结果为非典型性鳞状细胞(ASCUS)或低鳞状上皮病变(LSIL)时，可以通过一种非创伤性且比较有效的检测方法对患者进行辅助诊断。同时，该检测方法要求操作简单方便，稳定性好，结果易于观察。

发明内容

针对上述问题，本发明的第一方面提供了一种即用型抗体工作液，包括抗体试剂、牛血清白蛋白、非还原性糖、甜菜碱、环糊精、表面活性剂；其中所述抗体试剂为试剂A或试剂B；所述试剂A为p16^INK4a单克隆抗体和Ki-67单克隆抗体的PBS缓冲溶液；所述试剂B为辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗和碱性磷酸酶标记的羊抗兔二抗的PBS缓冲溶液；所述PBS缓冲溶液的pH值为7.2～7.8。