[发明专利]一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法

说明书

本发明提供一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法，涉及微生物技术领域，所述方法首先将产抗菌次生代谢产物的放线菌接种于液体培养基中培养，得到菌体发酵液；所述液体培养基的原料包括酵母提取物、葡萄糖和麦芽提取物和水；所得菌体发酵液接种于固体培养基发酵，得到活性发酵产物；所述固体培养基的原料包括介质支持物、酵母膏和蛋白胨和水；以乙酸乙酯浸提所述活性发酵产物，固液分离得到乙酸乙酯提取物，去除乙酸乙酯，得到放线菌抗菌次生代谢产物。本发明提供的制备方法能够明显增加放线菌抗菌次生代谢产物的积累，提高代谢产量；相对于单纯的液态发酵放线菌而言能耗低，发酵过程无需持续通入氧气。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法。

背景技术

放线菌抗菌活性次生代谢物的发酵通常是用一定的液体培养基进行液态发酵，实验室里一般用三角瓶在摇床里进行发酵，抗菌活性产物在发酵液中积累，通过一定的提纯手段将活性产物提取出来。一般情况下，发酵液中所能积累的活性产物的量非常少，由于发酵液中活性成分的浓度非常低，由于后续的提纯过程对活性成分损失比较大，有些含量低的活性成分无法被分离出来。因此，目前缺乏一种能够快速大量提取放线菌所产抗菌活性次生代谢产物的方法。

发明内容

本发明为了克服现有放线菌抗菌活性次生代谢产物的方法产量低、分离难度大、能耗高的缺陷，提供了一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法，所得抗菌次生代谢产物量可提高10倍以上，并且能耗低、产率高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种放线菌抗菌次生代谢产物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将产抗菌次生代谢产物的放线菌接种于液体培养基中培养65～80h，得到菌体发酵液；

按重量份计，所述液体培养基的原料包括酵母提取物2～8份、葡萄糖2～8份和麦芽提取物8～20份和水800～1000份；

(2)以所述菌体发酵液接种于固体培养基进行发酵，得到活性发酵产物；

按重量份计，所述固体培养基的原料包括介质支持物70～150份、酵母膏1～6份和蛋白胨7～20份和水80～120份；

所述介质支持物选自大米、高粱、小麦、米糠或稻壳中的一种或多种；

(3)以乙酸乙酯浸提所述活性发酵产物，固液分离得到乙酸乙酯提取物，去除乙酸乙酯，得到放线菌抗菌次生代谢产物。

优选的，所述步骤(1)中的培养时还伴随搅拌。

优选的，所述步骤(1)中的液体培养基pH为7.0～7.4。

优选的，所述步骤(2)中菌体发酵液的接种量为0.12～0.5ml/kg。

优选的，所述步骤(2)中的固体培养基制备方法包括以下步骤：

S1、将酵母膏、蛋白胨和水混合，调节pH值为7.5，得到预混合液；

S2、将预混合液与介质支持物混合，静置6～10h，得到混合物；

S3、将混合物灭菌，振荡至介质支持物的任意两个颗粒之间不粘连，得到固体培养基。

优选的，所述步骤(3)中，乙酸乙酯的浸提次数为2～4次。

优选的，步骤(3)中，所述乙酸乙酯浸提时，乙酸乙酯与固态发酵物的体积比为1:1。

优选的，步骤(3)中，所述浸提的时间优选为30～60min。

与现有技术相比，本发明的有益效果：