[发明专利]DNA条形码、引物、试剂盒、方法和应用在审

申请号：	201910168842.0	申请日：	2019-03-06
公开（公告）号：	CN111662995A	公开（公告）日：	2020-09-15
发明（设计）人：	徐丹洋;施佳辉;徐平;唐蜀昆;高林瑞;田飞;高慧英;职晓阳;丁章贵	申请（专利权）人：	勐海茶业有限责任公司;云南大益微生物技术有限公司
主分类号：	C12Q1/6895	分类号：	C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/685
代理公司：	北京天昊联合知识产权代理有限公司 11112	代理人：	王静;丁业平
地址：	666200 云南省西双***	国省代码：	云南;53
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摘要：
搜索关键词：	dna 条形码引物试剂盒方法应用
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【权利要求书】：

1.一种用于鉴别黑曲霉菌株的DNA条形码，该DNA条形码来源于黑曲霉TMCC 70012菌株的基因组，并且包含选自如SEQ ID No.4所示的DNA序列中的至少500bp的序列，并且该DNA条形码的长度为500bp-4000bp，优选为500bp-900bp。

2.根据权利要求1所述的DNA条形码，其核苷酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.4或SEQID No.7所示。

3.一种用于扩增权利要求1或2所述的DNA条形码的引物对。

4.根据权利要求3所述的引物对，其正向引物的核苷酸序列与黑曲霉TMCC 70012菌株基因组中的这样的序列相同：该序列为从所述TMCC 70012菌株基因组中如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列的第1位到如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列的第3510位的区域中的序列，并且该正向引物的长度为15-30bp；其反向引物与所述TMCC 70012菌株基因组中的这样的序列反向互补：该序列为从所述TMCC 70012菌株基因组中如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列的第471位到如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列的最后一位的区域中的序列，并且该反向引物的长度为15-30bp。

5.根据权利要求4所述的引物对，所述正向引物和反向引物的核苷酸序列分别如下所示：

正向引物：5’-ACGCCTCAGTAGAAGATAGT-3’；

反向引物：5’-CTTGCCATGGTGGTGGGATA-3’。

6.一种用于鉴别黑曲霉菌株的试剂盒，包含根据权利要求3-5中任一项所述的引物对。

7.一种用于鉴别黑曲霉菌株的方法，包括以下步骤：

a)提供待测菌株的基因组DNA；

b)以步骤a)所述的基因组DNA为模板，利用根据权利要求3-5中任一项所述的引物对进行PCR扩增，得到PCR产物；

c)通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，如果没有目标条带，则判定待测菌株不是黑曲霉TMCC 70012菌株，如果有目标条带，则进行步骤d)；

d)对所得PCR产物进行测序，得到待测核苷酸序列；将所述待测序列与权利要求1或2所述的DNA条形码的核苷酸序列进行同源性比对，若同源性在97％以上，则判定待测菌株是黑曲霉TMCC 70012菌株。

8.根据权利要求1或2所述的DNA条形码在鉴别黑曲霉菌株中的应用。

9.根据权利要求3-5中任一项所述的引物对在鉴别黑曲霉菌株中的应用。

10.根据权利要求6所述的试剂盒在鉴别黑曲霉菌菌株中的应用。