[发明专利]一种氯乙酰肼的检测方法和一种检测磷酸西格列汀中氯乙酰肼的方法

说明书

本发明提供一种基于亲水作用高效液相色谱法的氯乙酰肼的检测方法，色谱条件为：色谱柱：HILIC色谱柱；检测器：紫外检测器；流动相：乙腈为A相，0.1％磷酸水溶液为B相，等度洗脱，两相的体积比为：A∶B＝78～82％∶18～22％；流速：0.7ml/min～1.4ml/min；柱温：35℃～45℃；进样量：5ul。该检测方法的最低线性检出浓度为0.17μg/ml，以信噪比3:1确定方法的最低检出浓度为0.05μg/ml。本发明还提供上述检测方法在磷酸西格列汀杂质检测中的应用。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种氯乙酰肼的检测方法和一种检测磷酸西格列汀中氯乙酰肼的方法。

背景技术

糖尿病是一种以糖代谢紊乱为主的慢性综合性疾病，包括胰岛素依赖型糖尿病(Ⅰ型糖尿病)、非胰岛素依赖型糖尿病(Ⅱ型糖尿病，占比90％)及妊娠期糖尿病。国际糖尿病联盟发布的全球糖尿病地图(第8版)显示，2017年全球糖尿病患病率(20～79岁)大约为8.8％，约有4.25亿成人糖尿病患者，到2045年，这一数字可能达到6.29亿。中国是糖尿病患者人数最多的国家，约占世界总数的四分之一。

糖尿病作为一种高发慢性病，具有病情不可逆、后期并发症多等特点。血糖若控制不佳，糖尿病慢性化可引发糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变等并发症，造成肾衰、失明等严重后果，给社会和家庭造成巨大负担。同时，糖尿病也是引起众多心血管疾病的危险因素，如心肌梗死、脑卒中等。糖尿病的临床治疗需求一直未得到充分满足。

相关降糖机制研究表明，人体内血糖升高时可促进活性肠促胰岛激素胰高血糖素样肽-1(GLP-l)和葡萄糖依赖性促胰岛素分泌肽(GIP)的分泌，进而激发胰岛素的合成分泌过程，最终达到控制血糖的效果。体内的GLP-1和GIP容易被二肽基肽酶IV(DPP-IV)降解失活；因此，二肽基肽酶IV成为糖尿病治疗的靶点。磷酸西格列汀是首个获得美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗II型糖尿病的二肽基肽酶-4抑制剂(DPP-4抑制剂)，可有效抑制胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽(GIP)的灭活，提高内源性GLP-1和GIP的水平，促进胰岛β细胞释放胰岛素，同时抑制胰岛α细胞分泌胰高血糖素，从而提高胰岛素水平，降低血糖，且不易诱发低血糖和增加体重。

磷酸西格列汀，化学名称：7-[(3R)-3-氨基-1-氧-4-(2,4,5-三氟苯基)丁基]-5,6,7,8-四氢-3-(三氟甲基)-1,2,4-三唑酮[4,3-a]吡嗪磷酸盐(1:1)一水合物，化学分子式C₁₆H₁₅F₆N₅O·H₃PO₄·H₂O，化学结构如式(I)所示。

3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪盐酸盐(以下简称“XG-SM2”)，结构式如式(II)所示，是合成磷酸西格列汀过程中的一个重要中间体。氯乙酰氯是XG-SM2合成的起始物料之一，其非常易与肼(合成西格列汀原料药时所用到的另一种起始物料)反应生成氯乙酰肼。而氯乙酰酰肼不再参与其他反应，可能会在终产物中残留。酰肼具有基因毒警示结构；在药品安全性日益得到重视的情况下，药物中残留的极微量杂质的检测也逐步纳入药品质量标准或企业内控标准。因此，有必要建立氯乙酰肼的检测方法，并将其应用于磷酸西格列汀中可能存在的微量氯乙酰肼的检测方法，以确保临床患者用药的安全。