[发明专利]一类优化的人类白细胞介素-2基因及其表达方法和应用

权利要求书

1.优化的人类白细胞介素-2 hIL-2c的编码基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ IDNO:3所示。

2.优化的人类白细胞介素-2 hIL-2a，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

3.权利要求2所述的hIL-2a的编码基因，其特征在于，其核苷酸如SEQ ID NO：5所示。

4.包含权利要求1所述hIL-2c的编码基因或包含权利要求3所述hIL-2a的编码基因的重组表达载体。

5.包含权利要求1所述hIL-2c的编码基因或包含权利要求3所述hIL-2a的编码基因的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌为毕赤酵母GS115或毕赤酵母X33。

6.权利要求5所述的基因工程菌的表达方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）表达载体的构建：将优化的hIL-2c的编码基因或hIL-2a的编码基因构建到pPIC9K载体上，得到hIL-2表达载体；

（2）hIL-2基因的转化：将所述hIL-2表达载体酶切线性化电击转化入毕赤酵母感受态细胞中，利用组氨酸缺陷作为筛选标记筛选阳性克隆；

（3）重组菌株摇瓶发酵：将验证正确的阳性克隆接种到摇瓶中发酵，震荡培养；诱导发酵产生hIL-2；

（4）重组菌株放大发酵：将表达hIL-2的基因工程菌株接种到发酵罐中，诱导发酵产生hIL-2；

所述放大发酵过程包括以下培养阶段：

1）菌体培养阶段：向发酵罐中接入种子液，30℃培养20 ~ 24h，使发酵液中甘油耗尽；

2）饥饿阶段：当碳源甘油耗尽后，暂不补加任何碳源，待溶氧上升至80%饥饿阶段结束；

3）诱导表达阶段：用氨水调节pH至所需值，流加甲醇诱导，并且保持溶氧在20%以上，诱导时间为160 ~ 200h直至发酵结束。

7.蛋白hIL-2c或蛋白hIL-2a在用于制备促进动物生长性能的饲料添加剂中的应用，其特征在于所述动物包括鸡、鸭、猪、牛，所述蛋白hIL-2c由权利要求1所述的编码基因编码产生，所述蛋白hIL-2a由权利要求3所述的编码基因编码产生。