[发明专利]一种农作物逆境防御酶提取液及用其提取酶液的方法

说明书

本发明涉及一种农作物逆境防御酶提取液及用其提取酶液的方法，包括去离子水、三羟甲基氨基甲烷、抗坏血酸、二硫苏糖醇、谷胱甘肽、六水氯化镁和甘油；其中，每500ml溶液中包含3.00‑3.10g重量的三羟甲基氨基甲烷、0.08‑0.09g重量的抗坏血酸、0.07‑0.08g重量的二硫苏糖醇、0.15‑0.16g重量的谷胱甘肽、0.50‑0.60g重量的六水氯化镁以及95‑105ml的甘油，且该农作物逆境防御酶提取液的pH值为6.9‑7.1。该发明克服了现有农作物逆境研究中对农作物逆境酶中的过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶需要逐个提取，存在步骤繁琐、耗时长等缺点，其采用特别的组分比例配制而成，可一次提取获得过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶这5种酶的酶液，大大简化了试验程序，提高了试验效率，且提取效果好、酶活性稳定。

技术领域

本发明涉及一种农作物逆境防御酶提取液及用其提取酶液的方法，应用在农作物逆境防御酶的研究领域。

背景技术

过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)是膜保护系统的组成部分，能够清除植物体内的O₂-、·OH、¹O₂、H₂O₂，减少·OH的形成，维持植物体内的活性氧代谢平衡，保护膜结构，减轻有毒物质对活细胞的毒害，从而使植物能在一定程度上忍耐、抵抗逆境的胁迫。多酚氧化酶(PPO)参与植物体内酚类物质氧化形成醌的保卫反应，能够使一元酚和二元酚氧化生成醌，在植物对病菌侵染的防卫反应中起着重要作用。苯丙氨酸解氨酶(PAL)与细胞壁的重要组分木质素的形成有密切关系，也是植物逆境应激反应的标志性酶。

以上5种酶都是植物在逆境条件下产生的防御酶，其酶活性的高低可反应植物逆境应激反应的能力。目前传统方法对这5种酶进行活性测定时，需要按照《植物生理学实验指导》上记载的方法，采用不同方法逐个对各酶的酶液进行提取，之后再进行活性测定，过程比较繁琐。

因此，提供一种能够一次即可提取过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、多酚氧化酶以及苯丙氨酸解氨酶这5种逆境防御酶的操作简便且提取酶液效果佳的农作物逆境防御酶提取液及用其提取酶液的方法可以较大程度地简化试验程序，提高工作效率。

发明内容

为了克服现有农作物逆境研究中对农作物逆境酶中的过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶需要逐个提取，存在步骤繁琐、耗时长等缺点，本发明提供了一种农作物逆境防御酶提取液，其采用特别的组分比例配制而成，可一次提取获得过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶这5种酶的酶液，大大简化了试验程序，提高了试验效率，且提取效果好、酶活性稳定。

本发明的技术方案如下：

一种农作物逆境防御酶提取液，包括去离子水、三羟甲基氨基甲烷、抗坏血酸、二硫苏糖醇、谷胱甘肽、六水氯化镁和甘油；其中，每500ml溶液中包含3.00-3.10g重量的三羟甲基氨基甲烷、0.08-0.09g重量的抗坏血酸、0.07-0.08g重量的二硫苏糖醇、0.15-0.16g重量的谷胱甘肽、0.50-0.60g重量的六水氯化镁以及95-105ml的甘油，且该农作物逆境防御酶提取液的pH值为6.9-7.1。

其具体的配制方法为：

先将称取好的三羟甲基氨基甲烷、抗坏血酸、二硫苏糖醇、谷胱甘肽以及六水氯化镁倒入烧杯内，加入适量去离子水将其溶解混合，再向该混合溶液中加入甘油搅拌均匀，并用1-2mol/L的盐酸溶液将其pH值调至6.9-7.1(采用pH计测定)，最后加入去离子水将其定容至500ml，将溶液混匀后装入试剂瓶中，放入4℃冰箱保存备用。