[发明专利]一种用于测定高密度脂蛋白胆固醇的试纸及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种用于测定高密度脂蛋白胆固醇的试纸，试纸包括红细胞分离层、辅助分离层和反应层，红细胞分离层、辅助分离层和反应层是分离材料、分离膜和反应膜依次经过红细胞分离液、辅助分离液和反应液浸渍后干燥制得，红细胞分离液包括如下组分：缓冲盐、二价金属离子、分子量为30000～500000的硫酸葡聚糖钠盐、血凝素或Anti‑RBC抗体；辅助分离液包括如下组分：缓冲盐、表面活性剂I和多元醇；反应液包括如下组分：缓冲盐、表面活性剂II、多糖、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、抗坏血酸氧化酶、氧化性物质和显色剂；该试纸能简单、快速的检测高密度脂蛋白胆固醇的含量。本发明还提供了该试纸的制备方法和应用。

技术领域

本发明涉及胆固醇的测定技术领域，具体涉及一种用于测定高密度脂蛋白胆固醇的试纸及其制备方法和应用。

背景技术

人体血液中的胆固醇除了游离胆固醇，大部分与极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等脂蛋白结合成脂蛋白胆固醇形式存在。其中，HDL亦称为a1脂蛋白，比较富含磷脂质，在血清中的含量约为300mg/dl。其蛋白质部分，A－I约为75％，A－II约为20％。HDL接受来自于包括动脉壁的各组织的胆固醇，通过直接逆转运或间接逆转运，将其运入肝脏，再清除出血液，因此HDL与积累于细胞内的胆固醇的除去作用相关。因此HDL胆固醇是动脉粥样硬化(AS)、冠心病(CHD)的等各种动脉硬化症的危险预防因子(呈负相关)，其在血液中的水平对动脉硬化性疾病的诊断有特异的辅助作用；体内HDL胆固醇浓度测定对诊断冠心病、心脑血管病、肝炎、肝硬化等疾病具有一定的参考意义。

目前HDL胆固醇含量测定在临床试验中已经常规化。美国胆固醇教育计划(NCEP)对HDL胆固醇测定的建议中指出：HDL胆固醇测定的准确性非常重要，因为HDL胆固醇在一个很窄的浓度范围内与冠心病呈负相关；CHD危险增高的界限是在HDL胆固醇浓度范围的低端，测定的细小误差会产生相对大的影响。

测定HDL胆固醇的方法很多，目前常用的主要有超速离心法、电泳法和沉淀法。超速离心法是通过超速离心机，将HDL和其它脂蛋白分离后，用酶只测定HDL胆固醇的方法；电泳法是从其它脂蛋白分离HDL后，进行脂质的染色，测定其显色强度；沉淀法是通过使用聚阴离子与二价金属离子的组合等作为沉淀剂使CHM、LDL、VLDL沉淀出来，并使用化学试剂或酶测定残留在上清液中的HDL胆固醇。其中，超速离心法和电泳法操作复杂，需要专门的设备，临床检查实施起来不方便；沉淀法虽然不需要专门的设备，但是现有的沉淀法在甘油三酯浓度较高时，离心分离后，沉淀物会部分浮游，必须进行离心条件的设定；此外，在使用磷钨酸盐镁离子的方法中，溶液的pH会导致沉淀不均匀的问题，必须严格控制测定溶液的pH，该方法较繁琐。近年来，无需繁琐的操作且可以直接用自动分析装置测量的方法得到了普及。一种是通过使用硫酸化环糊精作为凝集剂，在与除HDL之外的脂蛋白充分反应后，使其与经聚氧乙二醇修饰的酶发生作用，再直接测定HDL胆固醇；一种是先使用触酶消除掉HDL以外的脂蛋白，然后使用对HDL具有特异作用的活化剂测定HDL。但是为了抑制除了HDL以外的脂蛋白所产生的反应，这两种直接测量HDL胆固醇的方法必须使用经PEG修饰的酶或抗体等昂贵的试剂，同时也需要大型设备对HDL胆固醇进行检测。

有鉴于此，非常有必要开发一种抗干扰能力强、对HDL胆固醇的检测更加灵敏的产品。

发明内容

本发明的目的在于克服上述技术不足，提出一种用于测定高密度脂蛋白胆固醇的试纸，无需离心、也无需大型检测设备就能简单、快速的检测高密度脂蛋白胆固醇的含量；本发明第二方面的目的，在于提出一种用于测定高密度脂蛋白胆固醇的试纸的制备方法；本发明第三方面的目的，在于提供一种该试纸的应用。

为达到上述技术目的，本发明的技术方案提供一种用于测定高密度脂蛋白胆固醇的试纸，所述试纸包括红细胞分离层、辅助分离层和反应层，所述红细胞分离层、辅助分离层和反应层是分离材料、分离膜和反应膜依次经过红细胞分离液、辅助分离液和反应液浸渍后干燥制得，其中，