[发明专利]一种DNA提取试剂盒和提取方法

权利要求书

1.一种DNA提取试剂盒，包括裂解液、结合液、蛋白酶K溶液、洗涤液I、洗涤液II、洗涤液III以及洗脱缓冲液；其中裂解液包含Tris 55 mM、EDTA 15 mM、NaCl 0.3 M、NaDC 0.5 %、NLS 0.5 %、GuHCl 75 %、TritonX100 2 %、NH₄Cl 0.15%、巯基乙醇 0.5%，pH为7.0；结合液包括异丙醇 65%、PEG 8000 10%、Brij 58 3%，pH为7.0；蛋白酶K溶液包括蛋白酶K 20 mg/ml；洗涤液I包括GuHCl 7M、Tris 10 mM、乙醇40%，pH为7.5；洗涤液II包括乙醇 70%、Tris15mM，pH为7.5；洗涤液III包括NaAc 10mM，pH为7.0；洗脱缓冲液包括Tris 20mM、EDTA0.2mM，pH为8.0。

2.使用权利要求1的DNA提取试剂盒提取唾液DNA的方法。

3.根据权利要求2的方法，具体包括：

（1）取唾液于离心管中，加入裂解液与结合液的混合液,再加入蛋白酶K溶液，最后加入磁珠；

（2）将离心管加热震荡，置于磁力分离架上，移走全部上清液；

（3）将离心管从磁力分离架中取出，加入洗涤液I，震荡，然后将离心管置于磁力分离架上处理，移走全部上清液；

（4）加入洗涤液II，震荡，然后将离心管置于磁力分离架上处理，移走全部上清液；

（5）加入洗涤液III，震荡，然后将离心管置于磁力分离架上处理，移走全部上清液；

（6）加入洗脱缓冲液，震荡，然后将离心管置于磁力分离架上处理，用将上清液移至另一离心管中；

（7）回收得到的DNA。

4.根据权利要求3的方法，具体包括：

（1）取200ul的新鲜唾液于1.5ml离心管内，然后加入总计400ul的裂解液与结合液1:1的混合液,再加入20ul蛋白酶K溶液，最后加入10ul磁珠；

（2）将离心管在60℃条件下震荡10分钟，将离心管置于磁力分离架上1分钟，使得管内的磁珠完全被吸附，用枪头在不接触到磁珠的前提下尽可能地移走全部上清液；

（3）将离心管从磁力分离架中取出，加入500ul 洗涤液I，涡旋震荡离心管5-10次，使磁珠充分混匀，然后将离心管置于磁力分离架上1分钟，使得管内磁珠完全被吸附，移走全部上清液；

（4）加入500ul 洗涤液II，涡旋震荡离心管5-10次，使磁珠充分混匀，然后将离心管置于磁力分离架上1分钟，使得管内磁珠完全被吸附，移走全部上清液；

（5）加入500ul 洗涤液III，涡旋震荡离心管5-10次，使磁珠充分混匀，然后将离心管置于磁力分离架上1分钟，使得管内磁珠完全被吸附，移走全部上清液；

（6）加入100ul洗脱缓冲液，在60℃温度下震荡5分钟，然后将离心管置于磁力分离架上2分钟，用枪头将上清液移至另一干净离心管中；

（7）回收得到的DNA，保存于-20℃。

5.根据权利要求1的DNA提取试剂盒在制备PCR检测试剂盒中的用途。

6.根据权利要求5的用途，所述PCR检测试剂盒还包括PCR反应所用的试剂。

7.根据权利要求5或6的用途，所述PCR检测试剂盒用于诊断或非诊断目的。