[发明专利]一种DNA提取试剂盒和提取方法

说明书

本申请提供了一种DNA提取试剂盒，包括裂解液、结合液、蛋白酶K溶液、洗涤液I、洗涤液II、洗涤液III以及洗脱缓冲液，裂解液中使用了巯基乙醇作为巯基还原剂，使用时裂解液和结合液以1:1的比例混合，洗涤液中使用了低浓度的NaAc进行离子平衡。

技术领域

本发明属于分子生物学检测技术领域，具体地，本申请提供了一种包括裂解液、结合液、蛋白酶K溶液、洗涤液I、洗涤液II、洗涤液III以及洗脱缓冲液的DNA提取试剂盒。

背景技术

核酸提取是各种分子生物学检测方法的基础，高效完整地提取DNA是PCR扩增、文库构建、测序等工作的基础。除组织器官样本外，分子生物学检测中最常用的离体样本为血液样本，但采血一方面需要专业人员使用无菌采血设备，成本和复杂程度较高，另一方面采血会给患者带来直接的疼痛和恐惧，受到很多人的排斥，由于以上原因，以血液样本进行分子生物学检测在许多情形下，特别是大范围筛查或鉴定中有诸多不便。

唾液属于可以无损伤轻易提取的生物样品，其成分与血清、血浆中存在较大差异：唾液为无色、无味、无嗅的液体；PH约6～7；粘度明显高于水；唾液中含有淀粉酶、溶菌酶、过氧化物酶、粘蛋白、粘多糖、磷脂等物质；其中的粘蛋白、粘多糖是使唾液粘稠主要物质，也是唾液DNA提取中主要问题所在。酚氯仿法、盐析法、吸附柱法、免疫亲和法、磁珠法等现有DNA提取方法中可用于唾液DNA提取的主要有吸附柱法和磁珠法，但吸附柱法提取效果和所提取DNA浓度上都有明显不足，而磁珠法在操作简易型和提取效果上也有很多待改进之处。

发明内容

本申请通过选择合理的裂解液、结合液比例、去垢剂、巯基还原剂和各成分用量(特别是，选用去垢剂NaDC，洗涤时使用低浓度的NaAC保持离子平衡)构建了新型DNA提取试剂盒，实现了与市售进口产品类似或更好的提取效果。

一方面，本申请提供了一种DNA提取试剂盒，包括裂解液、结合液、蛋白酶K溶液、洗涤液I、洗涤液II、洗涤液III以及洗脱缓冲液。

进一步地，其中裂解液包含Tris、EDTA、NaCl、NaDC、NLS、GuHCl、TritonX100、NH₄Cl、巯基乙醇；结合液包括异丙醇、PEG 8000、Brij 58；洗涤液I包括GuHCl、Tris、乙醇；洗涤液II包括乙醇、Tris；洗涤液III包括NaAc；洗脱缓冲液包括Tris、EDTA。

进一步地，其中裂解液包含Tris 40-60mM、EDTA 10-20mM、NaCl 0.1-0.9M、NaDC0.25％-0.7％、NLS 0.6％-0.9％、GuHCl 60％-75％、TritonX100 3％-5％、NH₄Cl 0.15％-0.24％、巯基乙醇0.5％-2.5％，pH为7.0-8.5；结合液包括异丙醇65％-90％、PEG 80002％-10％、Brij 58 3％-5％，pH为7.0-8.5；蛋白酶K溶液包括蛋白酶K 17-22mg/ml；洗涤液I包括GuHCl 2-7M、Tris 10-17mM、乙醇40％-60％，pH为7.5-8.5；洗涤液II包括乙醇70％-80％、Tris 10-15mM，pH为7.5-8.5；洗涤液III包括NaAc 10-20mM，pH为6.0-7.0；洗脱缓冲液包括Tris 10-20mM、EDTA 0.1-0.2mM，pH为8.5-9.5。

进一步地，其中裂解液包含Tris 55mM、EDTA 15mM、NaCl 0.3M、NaDC 0.5％、NLS0.5％、GuHCl 75％、TritonX100 2％、NH4Cl 0.15％、巯基乙醇0.5％，pH为7.0；结合液包括异丙醇65％、PEG 8000 10％、Brij 58 3％，pH为7.0；蛋白酶K溶液包括蛋白酶K 20mg/ml；洗涤液I包括GuHCl 7M、Tris 10mM、乙醇40％，pH为7.5；洗涤液II包括乙醇70％、Tris15mM，pH为7.5；洗涤液III包括NaAc 10mM，pH为7.0；洗脱缓冲液包括Tris 20mM、EDTA0.2mM，pH为8.0。