[发明专利]一种均相化学发光检测方法及其应用

说明书

本发明涉及化学发光分析领域的一种均相化学发光检测方法及其应用。该方法包括如下步骤：步骤S1，将包含化学发光配对微球中的第一微球及疑似包含待测目标分子的待测物的液相反应物与固相支持物表面接触反应，其中所述固相支持物表面设置有化学发光配对微球中对应的第二微球；步骤S2，利用能量或活性化合物激发化学发光配对微球中的一种微球生成活性氧，化学发光配对微球中的另一种微球与其接触到的活性氧反应产生化学发光信号；步骤S3，检测步骤S2中所述化学发光信号的强度，分析待测物中是否存在待测目标分子和/或待测目标分子的浓度。该方法可同时检测多个待检分子，反应速度快，且有效消除均相免疫检测中的基质效应。

技术领域

本发明属于化学发光分析领域，具体涉及一种均相化学发光检测方法及其应用。

背景技术

化学发光是一种特异的化学反应，有机分子吸收化学能后发生能级跃迁，产生一种高能级的电子激发态不稳定的中间体，当其返回到基态而发出光子，即为化学发光。将化学发光与抗原抗体相结合而形成的免疫分析技术，即为化学发光免疫分析。化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的发展方向。CLIA发展迅猛，已占各种免疫分析的首位，是目前放射免疫分析和酶联免疫分析最佳的取代者。

根据测定过程中是否要将待测物质与反应体系分离，免疫分析可以分为非均相免疫分析和均相免疫分析；非均相免疫分析，是指在引入探针进行标记的操作过程中，各种相关试剂混合反应后需要进行分离，将待测物与反应体系分离后再进行检测，是现在免疫分析中的主流方向，如：酶促化学发光分析、磁微球化学发光免疫分析。均相免疫分析是指在测定过程中将待测物与反应体系中的相关试剂混合反应后直接测定，例如：光激化学发光分析、电化学发光分析。

虽然均相免疫分析无需分离洗涤步骤，但是血清或血浆中的一些物质却会干扰标记信号检测或干扰化学发光反应。同时，在均相标记免疫分析技术中涉及化学发光的领域，有的涉及氧化还原反应，如血液标本中含有一些氧化-还原药物(如维生素C)同样干扰光信号的产生过程，严重影响检测结果的准确性。另外，目前均相免疫分析的每次反应仅能针对一个待检分子，费时费力。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种均相化学发光检测方法，该方法可同时检测多个待检分子，反应速度快、检测时间短，且有效消除均相免疫检测中的基质效应，提高了检测的准确性。

为此，本发明第一方面提供了一种均相化学发光检测方法，其包括如下步骤：

步骤S1，将包含化学发光配对微球中的第一微球及疑似包含待测目标分子的待测物的液相反应物与固相支持物表面接触反应，其中所述固相支持物表面设置有化学发光配对微球中对应的第二微球；

步骤S2，利用能量或活性化合物激发化学发光配对微球中的一种微球生成活性氧，化学发光配对微球中的另一种微球与其接触到的活性氧反应产生化学发光信号；

步骤S3，检测步骤S2中所述化学发光信号的强度，分析待测物中是否存在待测目标分子和/或待测目标分子的浓度。

在本发明的一些实施方式中，所述第二微球为供体微球。

在本发明的另一些实施方式中，所述第一微球为受体微球。

在本发明的一些实施方式中，所述固相支持物选自玻璃芯片、石英芯片、塑料芯片、高分子聚合物芯片、高分子微球、磁性微球、微孔板、NC膜和PDVF膜。

在本发明的另一些实施方式中，所述第二微球呈阵列式分布于固相支持物表面的不同区域。

在本发明的一些实施方式中，所述第二微球与磁性微球连接，所述磁性微球通过磁场固定在固相支持物的表面。