[发明专利]多功能特异性DNA杂化-门控介孔二氧化硅基因载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.多功能DNA杂化-门控靶向介孔二氧化硅基因载体的制备方法,其特征是,主要步骤如下：

1)介孔二氧化硅纳米颗粒的制备：介孔二氧化硅纳米颗粒采用CTAB模板法制备，制得的直径为50～100纳米；

2)采用两步法制备水溶性羧基的介孔二氧化硅纳米颗粒；

3)在羧基化的介孔二氧化硅纳米颗粒表面修饰DNA杂化交联体，制备DNA杂化-门控介孔二氧化硅纳米载体。

4)DNA杂化-门控多功能介孔二氧化硅纳米载体表面连接分子量为600的聚醚酰亚胺，制备多功能特异性DNA杂化-门控介孔二氧化硅基因载体。

2.根据权利要求1所述的多功能DNA杂化-门控靶向介孔二氧化硅基因载体的制备方法,其特征是,所述步骤1)具体为:

(1)在反应容器中配制浓度为1％～2％的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)的溶液10～20毫升；

(2)加入5～10毫升的无水乙醇和100～200微升的乙二醇，于400～500转/分钟，50～60℃加热条件下，搅拌反应10～30分钟；

(3)向反应容器中加入200～300微升的正硅酸乙酯于600～700转/分钟，60～70℃加热条件下搅拌反应10～20分钟，然后关闭加热再于400～500转/分钟条件下，搅拌反应30～40分钟；

(4)反应结束后，以12,000～13,000转/分钟，离心20～30分钟，并用无水乙醇洗涤沉淀，产物真空干燥后得到二氧化硅纳米颗粒；

(5)取制得的二氧化硅纳米颗粒10～20毫克，用无水乙醇配制成5～20毫克/毫升的溶液并转移至一反应容器中；

(6)向反应容器中加入0.5～0.6克氯化钠，于400～500转/分钟，50～60℃加热条件下搅拌反应3～5小时；

(7)反应结束后，静止20～30分钟，将上清转移至一离心管中，以12,000～13,000转/分钟，离心20～30分钟，并用无水乙醇洗涤沉淀1～3遍，得到介孔二氧化硅纳米颗粒。

3.根据权利要求1所述的多功能DNA杂化-门控靶向介孔二氧化硅基因载体的制备方法,其特征是,所述步骤2)具体为:

(1)取介孔二氧化硅纳米颗粒10～20毫克，用二甲基亚砜制成5～20毫克/毫升的溶液并转移至一反应容器中；

(2)加入10～20微升的3-氨丙基三乙氧基硅烷，于400～500转/分钟，搅拌6～10小时；

(3)待反应结束后，以12,000～13,000转/分钟，离心20～30分钟，并用去离子水洗涤沉淀1～3遍，得到氨基化的介孔二氧化硅纳米颗粒。

(4)取氨基化的介孔二氧化硅纳米颗粒10～20毫克，用N，N-二甲基甲酰胺制成5～20毫克/毫升的溶液并转移至一反应容器中；

(5)加入100毫克的丁二酸酐，于400～500转/分钟，搅拌6～10小时；

(6)待反应结束后，以12,000～13,000转/分钟，离心20～30分钟，并用去离子水洗涤沉淀1～3遍，得到羧基化的介孔二氧化硅纳米颗粒。