[发明专利]一种用于治疗烧烫伤术后修复皮下组织的人脐带间充质干细胞分泌因子注射液的制备方法

说明书

本发明涉及一种用于治疗烧烫伤术后修复皮下组织的人脐带间充质干细胞分泌因子注射液的制备方法，包括以下步骤：将胆固醇和卵磷脂溶解于溶剂，再除去溶剂得脂质体薄膜，加入人脐带间充质干细胞分泌因子基置于摇床上进行水化3小时，待脂质体薄膜脱落，获得大粒径脂质体，将大粒径脂质体超声均质，制得人脐带间充质干细胞分泌因子囊泡脂质体；将人脐带间充质干细胞分泌因子囊泡脂质体和复方电解质注射液混合均匀得到人脐带间充质干细胞分泌因子注射液。本发明制得的人脐带间充质干细胞分泌因子注射液刺激培养人原代真皮成纤维细胞，从而使人原代真皮成纤维细胞对Ⅰ型胶原纤维的表达增加，有助于皮肤创面伤口的修复。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，更具体的说，它涉及一种用于治疗烧烫伤术后修复皮下组织的人脐带间充质干细胞分泌因子注射液的制备方法。

背景技术

创面愈合是一个错综复杂的生物学过程，该过程通过细胞因子的高度协调介导细胞与细胞间或细胞与基质间的相互作用来修复受损组织。细胞因子的协调不良或功能障碍均可导致创面愈合“失控”，在临床上表现为创面难愈。难愈性创面常见于深度烧伤等疾病。

造成创面难愈的主要原因可分为两大类：一类是由病菌感染引起的创面难愈。这类创面难愈通常伴随免疫细胞的异常激活。由于树突状细胞、自然杀伤细胞等免疫细胞的持续激活，释放大量炎性因子、活性氧簇和蛋白水解酶，使创面局部处于长期过度的炎症反应阶段，从而导致肉芽组织和表皮组织长期无法形成。另一类是由局部缺血缺氧导致的创面难愈。创面局部血供不足引起营养成分及氧气供给的减少，造成胶原蛋白无法有效合成，同时基质金属蛋白酶的异常激活进一步导致大量细胞生长因子的降解，影响了创面局部成纤维细胞、表皮细胞和角质细胞的增殖和迁移能力，导致创面长期不愈合。

现阶段难愈性创面的治疗原则首先是局部治疗服从全身治疗；其次创面的外科处理是局部治疗的前提和基础，如局部清创和抗感染等；最后采用某些措施和方法来促进难愈性创面愈合。近年来促进难愈性创面愈合的方法很多，经典的方法主要包括新型敷料类、基因工程药物(生长因子)类、传统医药类以及组织工程类。存在的主要问题是抗感染差、血管化延迟、制备技术复杂、生产周期长，价格昂贵以及组织工程皮肤存在生理缺陷等。

干细胞疗法作为新型的治疗方式，其应用已涉及生长发育、创面愈合和组织工程等多个方面，其可能的作用机制如下：a.分化作用：干细胞作为新兴的种子细胞是一种具有多向分化潜能的细胞，移植干细胞能自我更新并可分化成多种细胞，对组织进行修复；b.旁分泌作用：干细胞能够分泌大量细胞因子，以间充质干细胞为例，其分泌因子在功能上主要可分为免疫调节、抗细胞凋亡、血管发生、支持干/祖细胞的增殖与分化、化学趋化、抗瘢痕六大类。它们通过自分泌或旁分泌的方式，改善机体局部微环境，促进内源性干细胞向伤口部位的迁移和分化，挽救濒临凋亡的细胞，从而达到修复组织的目的。

随着对干细胞研究的不断深入，研究者发现移植干细胞分化成组织细胞的几率很低且移植后存活时间很短。由于移植到患者体内的干细胞存活时间短暂的问题影响了其旁分泌作用的发挥。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种用于治疗烧烫伤术后修复皮下组织的人脐带间充质干细胞分泌因子注射液的制备方法，其刺激培养人原代真皮成纤维细胞，从而使人原代真皮成纤维细胞对Ⅰ型胶原纤维的表达增加，有助于皮肤创面伤口的修复。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种用于治疗烧烫伤术后修复皮下组织的人脐带间充质干细胞分泌因子注射液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将重量比为10：1的胆固醇和卵磷脂溶解于溶剂，再除去溶剂得脂质体薄膜，加入与脂质体薄膜等重量的人脐带间充质干细胞分泌因子基置于摇床上进行水化3小时，待脂质体薄膜脱落，获得大粒径脂质体，将大粒径脂质体超声均质，制得人脐带间充质干细胞分泌因子囊泡脂质体；将重量比为1：2的人脐带间充质干细胞分泌因子囊泡脂质体和复方电解质注射液混合均匀得到人脐带间充质干细胞分泌因子注射液。